【易菇論壇首發(fā)】組織分離法就是指通過菇體組織分離獲得純菌絲的方法。食用菌的子實體實際上就是菌絲體的紐結(jié)物，它具有很強(qiáng)的再生能力。因此，只要切取綠豆大的一小塊菇體組織，把它移植到培養(yǎng)基上，就能獲取純粹的菌絲體。從生物學(xué)的角度來看，乃是一種無性繁殖。后代不易發(fā)生變異，能保持原菌株的優(yōu)良特性。雙核菌絲中兩個核并沒有融合，即雙親的染色體并沒有發(fā)生重組，因此組織細(xì)胞沒有孢子細(xì)胞那樣具有豐富的遺傳性。但是也正由于組織細(xì)胞是雙核細(xì)胞。所以它們都能生育結(jié)實，不像孢子細(xì)胞那樣需要經(jīng)過一個配對過程。
組織分離培養(yǎng)的方法較簡單，取材較廣泛，無論是幼菇還是成熟菇，只要是新鮮的，即使它只有菌柄，也都能分離培養(yǎng)成菌種。
組織分離最好采用正處于旺盛生長中的幼嫩子實體或菇蕾作為分離材料，供組織分離的種耳、種菇，必須來自優(yōu)良的品系，且要選取幼嫩、肥壯、無病蟲害的優(yōu)良子實體。 把選出來的若干種耳、種菇，再按生產(chǎn)要求進(jìn)行系統(tǒng)的比較，擇優(yōu)去劣，把肥壯、飽滿、無病的種耳、種菇留作分離材料。淋雨或吸水的種耳、種菇易污染雜菌，一般不能作為分離材料。 采取菌蓋與菌柄交接處的組織進(jìn)行分離，效果最好，對于那些有內(nèi)或外菌幕保護(hù)的菇類來說,取在菌幕保護(hù)下的幼嫩菌褶接種，生活力更加旺盛。對于某些菌根菌，則取用靠近基部的菌柄組織才能成活。
種耳、種菇的表面無菌處理 為了得到無雜菌的培養(yǎng)物，種菇表面要用無菌水沖洗幾次，并用無菌濾紙吸干或用0.1%的升汞水浸幾分鐘，再用無菌水沖洗并揩干。只要掌握分離要領(lǐng)，種菇不作表面滅菌處理也是完全可以的。
接種塊的切?。喊逊N菇撕開，在菌蓋和菌柄交界處或菌褶處，切取一小塊組織作為接種材料。菌褶靠近子實體的外緣，容易沾上污物或感染雜菌。所以，分離時應(yīng)選擇清潔的、菌蓋邊緣向內(nèi)卷的種菇作為分離材料。為了減少帶雜菌的機(jī)會，切取組織塊時，應(yīng)盡量取小一些，因為肉眼看到的一小塊組織，其中就有許多菌絲了，切一小塊不僅可以減少污染，得到純度高的菌種，而且容易成活。但組織塊越小，越容易被接種針燙死。因此，接種針在火焰上過火消毒后，應(yīng)先冷卻才能接種。
組織塊移植到適宜的培養(yǎng)基上后，應(yīng)放在適合菌絲生長的溫度下培養(yǎng)，一般溫度為23～26℃。只有這樣，組織塊才可以迅速恢復(fù)生長，在氣候寒冷的條件下進(jìn)行組織分離，更應(yīng)注意保持一定的溫度。每天檢查試管斜面菌落生長情況，如從分離的菌肉組織塊上長出正常的白色菌絲，即分離成功，及時將生長出來的菌絲轉(zhuǎn)移新的試管斜面。若在組織塊附近或其他地方出現(xiàn)其他顏色雜菌生長應(yīng)予以淘汰。
組織分離法操作簡便，又不易帶入雜菌，容易獲得純菌種。但對銀耳、黑木耳等膠質(zhì)菌；因其子實體中菌絲的含量極少，如用組織分離培養(yǎng)，則往往不易成功。
利用組織分離法得到的菌種，在未做全面的檢測和測試之前，對其品種應(yīng)具有的區(qū)別性、均一性和穩(wěn)定性是一無所知的，因此不能作為新品種。只有在標(biāo)準(zhǔn)的條件和方法下，以親本為對照進(jìn)行全面的測試，其表現(xiàn)的性狀確實與親本有顯著的差異，而且這些差異的表現(xiàn)個體間是均一的，在不同的時間上是可重復(fù)的（即性狀穩(wěn)定）可作為新品種的審定對象。為了確保栽培效果，組織分離法所制成的菌種在沒小試之前，不易大面積投入生產(chǎn)。（作者MYB,轉(zhuǎn)載請注明來源于易菇論壇）