【作者】龍?jiān)气P 吳瑩瑩 賈薇 楊海芮 白旭 張勁松 楊焱 張赫男 欒軍 高玲 王毅謙 汪雯翰

【機(jī)構(gòu)】江蘇出入境檢驗(yàn)檢疫局動(dòng)植物與食品檢測(cè)中心 上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所農(nóng)業(yè)部南方食用菌資源利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室國(guó)家食用菌工程技術(shù)研究中心國(guó)家食用菌加工技術(shù)研發(fā)分中心上海市農(nóng)業(yè)遺傳育種重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn) 藥明康德新藥開發(fā)有限公司 石河子大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院

【摘要】利用細(xì)胞克隆實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)和alamarBlueTM細(xì)胞活力測(cè)定實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)樟芝皿培菌絲體醇提物石油醚萃取相和氯仿萃取相對(duì)SPCA-1非小細(xì)胞肺癌的體外抑制作用,并進(jìn)一步利用流式細(xì)胞術(shù)Annexin VFITC（fluorescein isothiocyanate）/PI（propidium iodide）雙染測(cè)定細(xì)胞早期凋亡率、流式細(xì)胞術(shù)2′,7′-二氯熒光素二乙酸酯（2′,7′-dichlorofluorescindiacetate,H2DCFDA）單染測(cè)定ROS（reactive oxygen species）釋放量、流式細(xì)胞術(shù)PI單染測(cè)定細(xì)胞周期變化和ELISA（enzyme-linked immunosorbent assay）檢測(cè)細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3、p53和PARP的表達(dá),探討樟芝皿培菌絲體醇提物石油醚萃取相和氯仿萃取相抑制SPCA-1增殖的作用機(jī)理。研究結(jié)果表明:樟芝皿培菌絲體醇提物石油醚萃取相和氯仿萃取相均能抑制SPCA-1細(xì)胞克隆的形成、遷移和增殖,石油醚萃取相的活性明顯好于氯仿萃取相;石油醚萃取相通過促進(jìn)SPCA-1釋放ROS來誘發(fā)線粒體依賴性早期凋亡的發(fā)生,并使促凋亡蛋白Caspase-3和p53表達(dá)上升,同時(shí)抑制蛋白PARP表達(dá),從而發(fā)揮其抑制SPCA-1肺癌細(xì)胞增殖的作用;而氯仿萃取相主要通過將SPCA-1細(xì)胞阻滯在S期抑制其增殖。

【關(guān)鍵詞】克隆形成; 遷移; 活性氧; 凋亡; 細(xì)胞周期; Caspase-3; p53; PARP;