【作者】李健 王鑫 胡志強(qiáng) 亢學(xué)平 杜忠偉 王旭 陳艷秋

【機(jī)構(gòu)】延邊朝鮮族自治州農(nóng)業(yè)科學(xué)院

摘要：根據(jù)樺褐孔菌(Inonotus obliquus)酸性蛋白酶(Acid protease,AP)基因(IO-AP)序列密碼子的偏好性優(yōu)化選擇酶切位點(diǎn)和載體,成功構(gòu)建pGEX-4T1-IO-AP原核表達(dá)載體;用熱激法將該載體轉(zhuǎn)化到大腸桿菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中,構(gòu)建樺褐孔菌酸性蛋白酶(IO-AP)重組菌。以此重組菌表達(dá)的IO-AP以包涵體形式存在,重組蛋白分子質(zhì)量約為60kDa。以獲得的較高純度的重組IO-AP作為免疫原,采用傳統(tǒng)3-2-2-2免疫方式免疫4只Balb/c小鼠,通過(guò)間接ELISA法測(cè)定抗血清效價(jià),4免之后,4只小鼠抗血清效價(jià)均大于121500,成功制備了IO-AP多克隆抗體。Western Blotting檢測(cè)表明,IO-AP在樺褐孔菌菌核形成過(guò)程中的表達(dá)呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì),以第二個(gè)時(shí)期(栽培130d,菌核長(zhǎng)至1.33g時(shí))AP蛋白表達(dá)量最高。 

基金：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31160408)； 延邊食藥用菌工程技術(shù)研究中心建設(shè)(2016JH02)；

關(guān)鍵詞：大腸桿菌重組蛋白; 樺褐孔菌; ELISA法; Western Blotting檢測(cè);