【作者】戚元成張倩薛元邱立友申進(jìn)文

【機(jī)構(gòu)】河南農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院

【摘要】為解析糙皮側(cè)耳原基期與菌絲期差異表達(dá)的基因,本研究以原基期c DNA為檢測子(tester)、雙核菌絲期c DNA為驅(qū)趕子(driver),采用抑制性消減雜交法(suppression subtractive hybridization,SSH)構(gòu)建了糙皮側(cè)耳SSH c DNA文庫。菌液PCR驗(yàn)證SSH c DNA文庫插入c DNA片段后,挑取了2 055個(gè)差異轉(zhuǎn)化子,差異轉(zhuǎn)化子經(jīng)3次反向Northern雜交篩選,得423個(gè)信號差異顯著的克隆;陽性克隆測序后,經(jīng)NCBI數(shù)據(jù)庫Blastn和Blastx比對,共得206條差異表達(dá)序列(expressed sequence tag,EST),重復(fù)序列去除后,有46個(gè)基因參與了細(xì)胞急救和防御、能量代謝、轉(zhuǎn)錄和蛋白調(diào)控、膜蛋白和信號轉(zhuǎn)導(dǎo),18個(gè)基因編碼未知功能的推定蛋白,5個(gè)無任何同源性的新基因。挑取10個(gè)差異表達(dá)基因進(jìn)行半定量RT-PCR,發(fā)現(xiàn)這些序列在原基期的表達(dá)水平顯著高于菌絲期。結(jié)果表明,本研究成功構(gòu)建了糙皮側(cè)耳原基期與菌絲期SSH c DNA文庫,為進(jìn)一步分離糙皮側(cè)耳生長發(fā)育相關(guān)基因并研究糙皮側(cè)耳的發(fā)育機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。 

【基金】國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系專項(xiàng)資金(CARS-24)； 河南省高等學(xué)校重點(diǎn)科研項(xiàng)目(13B180051)； 河南省高等學(xué)校重點(diǎn)科研項(xiàng)目(14A180023)~~；

【關(guān)鍵詞】糙皮側(cè)耳; 抑制性消減雜交cDNA文庫; 異表達(dá)基因; 反向Northern blot; 半定量RT-PCR;