【作者】安莉穎 易欣欣 秦麗娜 施思 陶勇 伍紅 董志揚

【機構】西南民族大學生命科學與技術學院北京農學院食品科學與工程學院中國科學院微生物研究所

【摘要】以里氏木霉Trichoderma reesei重要工業(yè)生產菌Rut C30為出發(fā)菌株,通過等離子體(ARTP)誘變篩選,以5‐氟乳清酸(5‐FOA)和尿苷(Uridine)進行篩選,獲得一株pyr4基因缺陷株Rut C30ΔU3。用含有野生型里氏木霉pyr4基因的互補質粒轉化突變株,可回復野生性狀。經測序發(fā)現其pyr4基因在核酸序列多個位點發(fā)生突變,其中包括兩個錯義突變和一個移碼突變,從而導致乳清酸核苷‐5′‐磷酸脫羧酶失活。經遺傳穩(wěn)定性研究分析,傳代5次后仍保持良好的尿苷依賴性、去葡萄糖阻遏以及高產纖維素酶特性。經實驗篩選獲得了pyr4基因缺陷菌株可作為基因表達系統(tǒng)的受體菌株,建立了以尿苷營養(yǎng)缺陷為篩選標記的木霉轉化系統(tǒng)。 

【基金】國家自然科學基金(No.30970073)； 國家重點基礎研究發(fā)展規(guī)劃(973項目)(No.2011CB707402)； 國家高技術研究發(fā)展計劃(863計劃)(No.2012AA092103)；

【關鍵詞】里氏木霉; 等離子體; 誘變; pyr4基因;