【作者】孫墨可 張曼 田娟 李曉薇 李海燕 李玉
【機(jī)構(gòu)】白城市農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)室 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)生物反應(yīng)器與藥物開發(fā)教育部工程研究中心 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)食藥用菌教育部工程研究中心
摘要：靈芝Ganoderma lingzhi是我國(guó)著名的藥用真菌。但是,作為一種營(yíng)養(yǎng)和保健價(jià)值都非常高的大型擔(dān)子菌,靈芝還缺乏完善的轉(zhuǎn)基因方法和安全轉(zhuǎn)基因體系。本研究建立了免疫調(diào)節(jié)蛋白基因的過(guò)表達(dá)系統(tǒng),并利用真菌特異性啟動(dòng)子GPD、終止子NOS和目的基因LZ-8構(gòu)建真菌特異性雙T-DNA表達(dá)載體p SB130NG-LZ8;利用溶壁酶提取靈芝原生質(zhì)體,并用FDA染色法檢測(cè)靈芝原生質(zhì)體活性,原生質(zhì)體成活率約為80%。通過(guò)PEG轉(zhuǎn)化法對(duì)靈芝原生質(zhì)體成功進(jìn)行了轉(zhuǎn)化,轉(zhuǎn)化得到的原生質(zhì)體在帶有潮霉素抗性平板上長(zhǎng)出,轉(zhuǎn)化率為3–4/μgpSB130NG-LZ8+107個(gè)原生質(zhì)體。轉(zhuǎn)化子通過(guò)PCR檢測(cè)和熒光定量PCR檢測(cè),獲得LZ-8在靈芝中的過(guò)表達(dá)。
基金：吉林省重點(diǎn)科技攻關(guān)項(xiàng)目(20150204027NY)~~；
關(guān)鍵詞：靈芝; 雙T-DNA載體; 目的基因LZ-8; PEG轉(zhuǎn)化法; 熒光定量PCR;