【作者】陳清清 孫炳劍 袁虹霞 施艷 李洪連

【機(jī)構(gòu)】河南農(nóng)業(yè)大學(xué)小麥玉米作物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室河南糧食作物協(xié)同創(chuàng)新中心

【摘要】由索氏平臍蠕孢Bipolaris sorokiniana引起的小麥根腐病,常和其他土傳真菌病害混合發(fā)生,傳統(tǒng)的癥狀鑒別方法很難區(qū)分,導(dǎo)致病害防控難度增加。為建立病菌實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)體系,根據(jù)ITS序列設(shè)計(jì)引物,篩選出1對(duì)特異性引物BS‐F/R,擴(kuò)增片段大小為280bp。以菌絲DNA為標(biāo)準(zhǔn)品構(gòu)建實(shí)時(shí)熒光定量標(biāo)準(zhǔn)曲線,并對(duì)其靈敏度、特異性、可重復(fù)性進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果表明,建立的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法速度快,靈敏度高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好。構(gòu)建的熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線循環(huán)閾值與模板濃度呈良好的線性關(guān)系,溶解曲線的吸收峰單一,擴(kuò)增效率良好。利用該定量檢測(cè)體系,可以檢測(cè)出田間小麥樣品中52.8fg/μL的病菌DNA。 

【基金】國(guó)家“十二五”糧食豐產(chǎn)科技工程項(xiàng)目(No.2012BAD04B07)； 中國(guó)科學(xué)院重點(diǎn)部署項(xiàng)目(No.CXJO120111)； 河南省農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新項(xiàng)目(No.2012-06)；

【關(guān)鍵詞】土傳病害; 菌絲DNA; ITS序列; 實(shí)時(shí)熒光定量PCR; 小麥根腐病菌; 定量檢測(cè);