【作者】蔣婧婧 馬忠友 李佳麗 劉振邦 黃勃 李增智
【機(jī)構(gòu)】安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)微生物防治省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 安徽科技學(xué)院生物系
摘要：經(jīng)對比,薩氏麥芽糖-酵母浸粉培養(yǎng)液(SMY)較適合制備萊氏野村菌Nomuraea rileyi芽生孢子。以菌株Nr09接種該培養(yǎng)基,在130r/min、25℃全光照下震蕩培養(yǎng),觀察芽生孢子在不同時期發(fā)育的形態(tài)變化。結(jié)果表明,分生孢子萌發(fā)產(chǎn)生芽管;24h萌發(fā)率為42%,36h時達(dá)84%。芽管迅速伸長形成菌絲。在48h前芽生孢子通過菌絲頂端及分枝末端縊縮的方式形成,后期則主要通過芽生孢子繼續(xù)出芽的方式大量形成,78h芽生孢子數(shù)量達(dá)到最大值。芽生孢子的形成方式可為一端、兩端或多端芽殖。芽生孢子的形成過程可分為5個階段:(I)分生孢子膨大期;(II)芽管萌發(fā)期;(III)芽管延長期;(IV)芽生孢子形成初期;(V)芽生孢子指數(shù)生長期。30h后培養(yǎng)液中有少量草酸鈣結(jié)晶出現(xiàn)并逐漸增多。到84h時有31%的芽生孢子細(xì)胞內(nèi)液泡聚集增大,表明芽生孢子已開始進(jìn)入衰老階段。使用指數(shù)生長期制備的Nr09芽生孢子進(jìn)行幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)化,轉(zhuǎn)化效率達(dá)79個轉(zhuǎn)化子/μgDNA。
基金：“863”計劃(No.2006AA10A212)； 國家自然科學(xué)基金(No.30972368)； 教育部高等學(xué)校博士點(diǎn)專項(xiàng)科研基金(No.200503644001)； 安徽省高校省級自然科學(xué)研究重點(diǎn)項(xiàng)目(No.TD200708)；
關(guān)鍵詞：分生孢子; 萌發(fā); 芽管; 草酸鈣結(jié)晶; 液泡; 基因轉(zhuǎn)化;