【作者】喬宇 毛愛(ài)軍 何永志 劉偉豐 董志揚(yáng)

【機(jī)構(gòu)】中國(guó)科學(xué)院微生物研究所中國(guó)科學(xué)院微生物研究所 北京100080

【摘要】采用外顯子拼接的方法,以里氏木霉Trichoderma reesei基因組 DNA 為模板,克隆出內(nèi)切-1,4-β-D-葡聚糖酶II基因egl2的全編碼序列,將其插入巴斯德畢赤酵母Pichia pastoris表達(dá)載體pPIC9K中,并位于α-因子信號(hào)肽序列的下游,獲得重組質(zhì)粒pQY2025。重組質(zhì)粒線(xiàn)性化后用電穿孔法導(dǎo)入畢赤酵母Pichia pastoris菌株GS115中,經(jīng)大量篩選,獲得高效分泌表達(dá)內(nèi)切葡聚糖酶II的畢赤酵母工程菌株Gp2025。用甲醇誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行搖瓶發(fā)酵,培養(yǎng)基中內(nèi)切葡聚糖酶II的活力可達(dá)1573.0U/mL,同時(shí)對(duì)重組內(nèi)切葡聚糖酶II的性質(zhì)進(jìn)行了初步研究。 

【基金】國(guó)家“863”計(jì)劃(2001AA214151)； 中國(guó)科學(xué)院知識(shí)創(chuàng)新方向性課題 (KJCX2-SW-206-1)；

【關(guān)鍵詞】纖維素酶; 分泌表達(dá); 應(yīng)用;