【作者】賴衛(wèi)華 許楊 熊勇華

【機(jī)構(gòu)】教育部食品科學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室南昌大學(xué)食品科學(xué)工程系 教育部食品科學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室.中德聯(lián)合研究院教育部食品科學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室.中德聯(lián)合研究院 南昌330047

【摘要】應(yīng)用抑制性消減雜交技術(shù),構(gòu)建紅曲菌產(chǎn)桔霉素和不產(chǎn)桔霉素差異表達(dá)的cDNA消減文庫(kù)。分別從產(chǎn)桔霉素和不產(chǎn)桔霉素的紅曲菌絲體中提取mRNA,依次合成單鏈和雙鏈cDNA,經(jīng)酶切成大小為250~750bp的片斷,將產(chǎn)桔霉素的cDNA分為兩組,分別與兩種不同的接頭連接,再與不產(chǎn)桔霉素的紅曲菌的cDNA進(jìn)行兩次消減雜交及兩次抑制性PCR后,將產(chǎn)物與T/A載體連接構(gòu)建成功cDNA消減文庫(kù),并轉(zhuǎn)染大腸桿菌進(jìn)行文庫(kù)擴(kuò)增,文庫(kù)擴(kuò)增后得到283個(gè)克隆,經(jīng)PCR法快速測(cè)定,均得到250~750bp的插入片斷。所構(gòu)建的紅曲菌cDNA消減文庫(kù)為進(jìn)一步篩選紅曲菌中與產(chǎn)桔霉素性狀相關(guān)的基因奠定了基礎(chǔ)。  

【基金】國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目；

【關(guān)鍵詞】桔霉素; 抑制性消減雜交; 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng);