【作者】孫劍秋 周東坡 馬玉超 李晶 解玉紅 張鵬 平文祥

【機(jī)構(gòu)】齊齊哈爾大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院；黑龍江大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 齊齊哈爾161006

【摘要】以紫杉醇產(chǎn)生菌樹狀多節(jié)孢HQD33的誘發(fā)突變株UL50-6和UL40-19 為出發(fā)菌株,將收集到的出發(fā)菌株UL50-6和UL40-19的菌絲體分別用pH5.5~6.0的0.7mol/L NaCl配制的3%溶壁酶、2%蝸牛酶、1%溶菌酶組成的復(fù)合酶系,30℃恒溫酶解3~5h,制備原生質(zhì)體。兩菌株的原生質(zhì)體經(jīng)純化后分別用熱和紫外線滅活,其中UL50-6的原生質(zhì)體在54℃熱滅活5分鐘,UL40-19的原生質(zhì)體在30W紫外燈下,30cm,照射85秒進(jìn)行紫外滅活,雙親株的原生質(zhì)體存活再生率為零。同時(shí)對(duì)融合條件進(jìn)行了初步探索,以含有Ca2+和Gly的35%~40%的PEG作為融合劑,融合時(shí)間為20分鐘時(shí),融合率可以達(dá)到4.44?0-2~6.92?0-2。對(duì)融合株TPF-1與雙親株的形態(tài)學(xué)、可溶性蛋白、過氧化物同工酶進(jìn)行分析,確證其為雙親株的融合子。 

【基金】黑龍江省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(93-C-11)； 黑龍江省“九五”重大攻關(guān)項(xiàng)目(G98C20-16-1)；

【關(guān)鍵詞】樹狀多節(jié)孢; 原生質(zhì)體; 融合; 滅活;