【作者】劉德榮 謝丙炎 黃三文 朱國仁 吳新平 顧寶根

【機(jī)構(gòu)】中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所；農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所；

【摘要】根據(jù)灰霉病菌Botrytis cinerea對苯并咪唑類（苯萊特）及N－苯氨基甲酸酯類（乙霉威）殺菌劑的抗性與其β－微管蛋白的198和200位密碼子的單堿基突變緊密相關(guān)的原理，建立了一種同時(shí)檢測灰霉病菌對這兩類殺菌劑抗性表型的特異等位聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（ASP,Allele-specific Polymerase Chain Reaction）方法，即將突變的單堿基作為正引物的3’末端，與之對應(yīng)的未突變的單堿基作為負(fù)引物的3’末端， 自行設(shè)計(jì)了LP4～LP8等五個等位點(diǎn)特異性引物，應(yīng)用包括這五個引物在內(nèi)的七組引物，對生測為BenSNPCR、BenHRNPCS和BenHRNPCR菌株進(jìn)行了ASP擴(kuò)增，結(jié)果表明：該方法可以檢測出相應(yīng)抗藥表型的菌株，并能有效地檢測田間灰霉病菌的抗藥性，從而該方法克服了生物檢測方法費(fèi)時(shí)和準(zhǔn)確性差等缺點(diǎn)。該方法還能鑒定出生測法確定為同一表型如BenHRNPCR 中的BenSNPCR異核菌絲，或灰霉病菌侵染寄主后所產(chǎn)生的回復(fù)突變，因此其方法的靈敏度極高，可應(yīng)用于灰霉病菌抗藥性分子生態(tài)學(xué)機(jī)理研究和田間抗性菌株的快速鑒定。由于未發(fā)現(xiàn)BenMRNPCR型菌株，其適用性有待進(jìn)一步驗(yàn)證。

【基金】國家“九五”科技攻關(guān)項(xiàng)目；

【關(guān)鍵詞】灰霉病菌; 抗藥性; 特異等位PCR; 苯萊特; 乙霉威;