【作者】鄧大綸；田波；陸師義；

【機(jī)構(gòu)】中國(guó)科學(xué)院微生物研究所；中國(guó)科學(xué)院微生物研究所 北京 100080；

【摘要】我們用玉米黑粉菌(Ustilago maydis)熱休克基因(Heat shock gene,hsp 70)的啟動(dòng)子和終止子與新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶基因相連,構(gòu)建成了有效的雙功能質(zhì)粒pDL1(在E。coli中用Amp作為選擇標(biāo)記,在玉米黑粉菌中用新霉素作為選擇標(biāo)記)。以分離的一株新霉素敏感的玉米黑粉菌作為受體菌,用構(gòu)建的pDL1質(zhì)粒作為供體DNA,對(duì)影響受體菌原生質(zhì)球的形成條件(培養(yǎng)基、菌齡、各種酶、酶的濃度、作用時(shí)間和滲透壓穩(wěn)定劑)、再生條件和DNA轉(zhuǎn)化條件進(jìn)行了初步研究。對(duì)數(shù)前中期收集的菌體,以5mg/ml真菌溶壁酶處理30分鐘左右,90%都形成原生質(zhì)球,其再生率為60—80%,轉(zhuǎn)化率為300—1000轉(zhuǎn)化子/μg DNA。隨機(jī)選出25個(gè)轉(zhuǎn)化子,DNA雜交都為陽(yáng)性。分析dot-blot和Southern blot DNA雜交結(jié)果,發(fā)現(xiàn)質(zhì)粒在細(xì)胞中以整合形式存在,一個(gè)細(xì)胞可以有多拷貝的整合質(zhì)粒,質(zhì)?？赡芤苑峭耆葱缘闹亟M形式,參入性地整合進(jìn)染色體中。    

【關(guān)鍵詞】玉米黑粉菌；DNA載體的構(gòu)建；原生質(zhì)球轉(zhuǎn)化和再生；