樺褐孔菌ISSR-PCR反應(yīng)體系優(yōu)化與建立
Establishment and Optimization of ISSR-PCR Reaction System of Inonotus obliquus

【作者】 閆可； 尹勇剛； 傅常娥； 陳艷秋； 冉麗萍；

【Author】 YAN Ke,YIN Yong-gang,FU Chang-e,CHEN Yan-qiu,RAN Li-ping(Agricultural College of Yanbian University,Yanji Jilin 133002)

【機(jī)構(gòu)】 延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院；

【摘要】 采用改良CTAB法提取了樺褐孔菌總DNA,確定ISSR最適25μL反應(yīng)體系為模板DNA濃度15 ng.μL-1,dNTPs濃度150μmol.L-1,引物濃度25μmol.L-1,Taq DNA聚合酶濃度2.0 U,Mg2+濃度1.4 mmol.L-1,10×buffer 2.5μL,其余用ddH2O補(bǔ)足;確定ISSR擴(kuò)增程序?yàn)?94℃預(yù)變性5 min,35個(gè)循環(huán):94℃變性1 min、45℃~51℃退火1 min(退火溫度因不同引物而定)、72℃延伸1 min,最后72℃延伸5 min,4℃保存。篩選出16條ISSR引物,并成功應(yīng)用引物UBC842完成了21株樺褐孔菌的ISSR-PCR反應(yīng)。

【Abstract】 The high quality genome total DNA of Inonotus obliquus extracted fast through the CTAB law,was used in ISSR amplification.And the optimal 25 μL ISSR reaction system of Inonotus obliquus was determined.The template DNA density was 15 ng·μL-1,dNTPs was 150 μmol·L-1,the primer density was 25 μmol·L-1,the Taq DNA polymerase was 2.0 U,the Mg2+ concentration was 1.4 mmol·L-1,the 10×buffer density is 2.5 μL,and the rest are supplemented with the double-distilled water.And the procedures of ISSR amplifi...

【關(guān)鍵詞】 樺褐孔菌； ISSR； 反應(yīng)體系； 優(yōu)化；

【Key words】 Inonotus obliquus； ISSR； Reaction systerm； Optimization；
 
【基金】 國家自然基金項(xiàng)目部分內(nèi)容,編號(hào):31160408

【分類號(hào)】S567.39