目前貴州省沒有育成優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)、固定遺傳性狀的本地優(yōu)良品種,生產(chǎn)所需菌種均從外地引進(jìn),因此受到食用菌市場上菌種混亂、用種隨意、相互交叉、菌種制備不規(guī)范、菌種退化等一系列問題的嚴(yán)重影響。盧穎穎指出,在種源受制于人已成為貴州省茯苓GAP基地建設(shè)的瓶頸,對茯苓菌種進(jìn)行篩選和研究是十分必要的。為此,從貴州省黎平、臺江、劍河等區(qū)縣選取菌株13株,包含野生菌核和人工栽培菌核;中國微生物菌種保管委提供5.78等6株;國內(nèi)生產(chǎn)主栽川杰1號、同仁堂1號,共計(jì)23株進(jìn)行試驗(yàn)研究。通過茯苓菌核組織分離、觀察茯苓菌絲形態(tài)顯微觀察及熒光核染色、茯苓菌絲生長培養(yǎng)基配方正交篩選、優(yōu)良菌株初步篩選、原種培養(yǎng)基粗篩、優(yōu)良菌株復(fù)篩、茯苓基因組DNA的RAPD分析、優(yōu)良菌株遺傳穩(wěn)定性分析、菌種保藏等操作。
盧穎穎總結(jié)此次研究篩選模型既涵蓋了優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)菌株菌絲體和菌種體外觀、微生物學(xué)檢驗(yàn)、生長速度及對基質(zhì)的降解能力、栽培性狀、遺傳穩(wěn)定性等4大項(xiàng)的檢測和檢驗(yàn),優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)菌株的篩選與篩選模型的建立將填補(bǔ)目前茯苓生產(chǎn)上沒有一套簡便、快捷、有效的菌種篩選方法的空白,對將來的茯苓菌種選育及菌株優(yōu)選具有重要的參考價(jià)值和指導(dǎo)意義。試驗(yàn)中利用RAPD技術(shù)對10株外來菌株和貴州道地茯苓菌核分離株進(jìn)行遺傳分析和鑒定,RAPD分析結(jié)果顯示不同來源的茯苓菌株親緣關(guān)系非常相近,僅在某些引物的擴(kuò)增物上存在較小的差異。對品種的鑒定鑒別所得聚類結(jié)果與形態(tài)和栽培性狀鑒定結(jié)果完全一致。試驗(yàn)中采用斜面菌種保藏和甘油菌保藏兩種保藏方法進(jìn)行保藏,結(jié)果表明,甘油菌種保藏法和斜面菌種保藏法對茯苓菌種的保藏效果均較理想。但斜面菌種保藏時(shí)間相對較短,對設(shè)備和技術(shù)要求均較低,操作成本也較低,適合沒有超低溫冰柜和凍干機(jī)的單位使用;而甘油菌保藏法較適于茯苓菌種的長期保藏,特別適合茯苓母種的長期保藏。