1主題內(nèi)容與適用范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了市售銀耳的衛(wèi)生要求。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于人工合成料栽培銀耳、人工段木栽培銀耳和野生銀耳。銀耳制品和鮮銀耳亦可參照此標(biāo)準(zhǔn)。

2引用標(biāo)準(zhǔn)

GB5009.11食品中總砷的測(cè)定方法

GB5009.12食品中鉛的測(cè)定方法

GB5009.17食品中總汞的測(cè)定方法

3感官指標(biāo)

感官指標(biāo)見(jiàn)表1。

項(xiàng)目指標(biāo)

外形色澤氣味

干成品朵形完整。合成料栽培葉片白色或淺黃色，應(yīng)具有銀耳正常

銀耳直徑≥3cm；段木表面有光澤，耳基芳香氣味，無(wú)異

栽培銀耳直徑≥lcm部呈米黃色或橙色，味、異嗅

無(wú)霉點(diǎn)，霉斑

干成品浸泡(40℃，30min)朵形

完整，直徑明顯增大，

葉片應(yīng)完全展開(kāi)或基本

展開(kāi)，邊緣整齊，有彈

性，無(wú)發(fā)粘，軟塌現(xiàn)象　　

4理化指標(biāo)

理化指標(biāo)見(jiàn)表2

項(xiàng)目指標(biāo)，mg/kg

米酵菌酸0.25

鉛(以Pb計(jì))2.0

砷(以As計(jì))1.5

汞(以Hg計(jì))0.6

5檢驗(yàn)方法

5.1米酵酸菌[bongkrekicacid(BA)，即酵米面黃桿菌毒索A(flavotoxinA)〕是由椰毒假單胞菌(pseudomanascocovenenans)產(chǎn)生的一種可以引起食物中毒的毒素。系統(tǒng)命名為：3-羧甲基-17-甲氧基-6，18，21-三甲基-甘二碳-2，4，8，12，14，18，20-七烯二酸、結(jié)構(gòu)式為：

5.1.1薄層色譜測(cè)定法

5.1.1.1原理

樣品中的米酵菌酸經(jīng)提取、凈化及濃縮后，根據(jù)其在短波紫外光GF254硅膠薄層色譜上顯示黑色點(diǎn)的最低檢出量測(cè)定含量。

5.1.1.2儀器

a.層析槽(內(nèi)徑長(zhǎng)×寬×高，cm：25×6×4)

b.GF254娃膠薄層(50mm×200mm×0.3mm)，自制，經(jīng)110一115℃活化2―3h，置干燥器中可保存一周；

c.紫外線燈(波長(zhǎng)254nm)；

d.紫外分光光度計(jì)。

5.1.1.3試劑

本標(biāo)準(zhǔn)所用的試劑除特殊規(guī)定外，均為分析純，水為蒸餾水或同等純度的水，溶液為水溶液。

a.硅膠GF254層析用；

b.薄層色譜展開(kāi)劑：石佃醚-無(wú)水乙醚-冰乙酸[60十40十l.5(v十v)〕；

c.米酵菌酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取米酵菌酸標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇配制成每毫升含有米酵茵酸20μg作測(cè)定用，置于4℃冰箱中避光保存；

d.甲醛；

e.冰乙酸；

f.石油醚，沸程30―60℃；

g.無(wú)水乙醚；

h.三氯甲烷；

i.85g／100mL磷酸；

j.4％(V／V)碳酸氫鈉水溶液；

k.6mol／L鹽酸。

5.1.1.4操作方法

5.1.1.4.1米酵菌酸的提取

干銀耳樣品經(jīng)粉碎過(guò)40目篩后，稱取20g，置具塞錐形瓶中，加入甲醇20mL，于室溫中避光浸泡lh，然后再加入三氯甲烷80mL和85g／100mL磷酸0.2mL，鮮銀耳樣品經(jīng)剪碎、磨細(xì)及混勻后稱取10g，加入甲醇16mL于室溫中避光浸泡lh，然后再加入三氯甲烷64mL和85g／100mL的磷酸0.16mL；振蕩30min，過(guò)濾，干銀耳取濾液50mL，鮮銀耳取濾液40mL。

將以上濾液移入分液漏斗中，加入與濾液體積相同的4％(V／V)碳酸氫鈉水溶液，振搖2min，靜置分層，用帶自動(dòng)控制球吸管吸出上層于另一分液漏斗中，再用4％(V／V)碳酸氫鈉水溶液重復(fù)提取兩次，每次10mL，輕搖，靜置，將三次碳酸氫鈉水層合并，加入三氯甲烷25mL，振搖2min，靜置分層后棄去三氯甲烷層，于分液漏斗中慢慢滴入6mol／L鹽酸以調(diào)該溶液PH至2―3，加入石油醚(沸程30―60℃)50mL(鮮銀耳樣品加40mL)，振搖3min，靜置分層，取出石油醚層于梨形瓶中，再重復(fù)用石油醚30mL和20mL各提取一次(鮮銀耳樣品兩次均為20mL)，將石油醚層并人同一瓶中，于40℃水浴中減壓吹氣濃縮至干，用甲醛移至帶lmL刻度的濃縮管中，于40℃用減壓法濃縮至0.2mL以下，并用少許甲醇洗管壁，繼續(xù)濃縮至干，加甲醛0.125mL，將干物質(zhì)溶解，混勻，作為樣液以供薄層色譜測(cè)定用。

5.1.1.4.2薄層色譜測(cè)定

以薄層板的短邊為底邊，距底邊3cm的基線上用微量注射器滴加20ug／mL標(biāo)準(zhǔn)液8μL與10μL兩個(gè)點(diǎn)，以及樣液兩個(gè)點(diǎn)，每點(diǎn)10μL(鮮銀耳樣品滴加20μL)，在樣液的一個(gè)點(diǎn)上再滴加20μg／mL標(biāo)準(zhǔn)液10μL。用展開(kāi)劑展開(kāi)16cm，取出揮干。在254nm紫外燈光下觀察結(jié)果如下：(1)標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)應(yīng)出現(xiàn)黑色點(diǎn)；(2)如樣液點(diǎn)在標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)相應(yīng)位置上未出現(xiàn)黑色點(diǎn)，則樣品中米酵菌酸的含量在測(cè)定方法靈敏度0.25ppm以下；如在相應(yīng)位置上有黑色點(diǎn)，而另一點(diǎn)中樣液與標(biāo)準(zhǔn)液點(diǎn)重疊，則為陽(yáng)性，根據(jù)樣液黑點(diǎn)的強(qiáng)度估計(jì)減少滴加微升數(shù)，或經(jīng)稀釋后再滴人不同微升數(shù)，直至樣液與標(biāo)準(zhǔn)色點(diǎn)的強(qiáng)度與面積一致為止。米酵菌酸的比移值為0.22。

5.1.1.4.3計(jì)算

V11

X1=0.2w------wDw----…………………(1)

V2m1

式中：X1―米酵菌酸含量，μg／g；

0.2――米酵菌酸的最低檢出量，μg；

V1―加入甲醇溶解的體積，mL；

V2―出現(xiàn)最低檢出量時(shí)滴加樣液的體積，mL；

D――樣液的總稀釋倍數(shù)；

m1―甲醇溶解時(shí)相當(dāng)樣品的質(zhì)量，g。

5.1.1.4.4確證試驗(yàn)

對(duì)含量高的樣品可以進(jìn)一步作確證試驗(yàn)；將剩余的陽(yáng)性樣液與空白甲醇液分別經(jīng)薄層分離后，刮下并收集與米酵菌酸標(biāo)準(zhǔn)相應(yīng)的色譜帶與空白處硅膠。各加甲醇4mL，于室溫中浸泡l一2h，混勻，離心，吸出上清液，以空白硅膠甲醇洗脫液作對(duì)照，用紫外分光光度計(jì)測(cè)定，應(yīng)在267nm和236nm處有米酵菌酸的兩個(gè)最高吸收峰。

5.1.2高壓液相色譜測(cè)定法

5.1.2.1原理

樣品中的米酵菌酸經(jīng)提取、凈化及濃縮后，根據(jù)在高壓液相色譜上的出峰面積測(cè)定含量。

5.1.2.2試劑

a.高壓液相色譜洗脫劑：甲醇-水-冰乙酸[75十27十1.7(V／V),在配制前，所用試劑及水均需分別重蒸餾。

b.其他試劑同5.1.1.3c、d、e、I、g、h、i、j、k。

5.1.2.3儀器

a.高壓液相色譜儀；

b.20μL樣品環(huán)；

c.分光光度檢定器，調(diào)波長(zhǎng)至267nm；

d.求積儀；

e、防護(hù)柱4.6mmID×5cm，內(nèi)裝C―18硅膠，粒度直徑為10μm；

f.分析柱AltexUltrasphereTM―ODS，粒度直徑為u5m，4.6mmID×25cm。

5.1.2.4操作方法

5.1.2.4.1米酵菌酸的提取

同5.1.1.4.1，但最后不用甲醇轉(zhuǎn)移，直接于瓶?jī)?nèi)加入甲醇0.5mL，將干物質(zhì)溶解，混勾，取出上清液經(jīng)離心后，置小試管中，作為樣液供高壓液相色譜測(cè)定用。

5.1.2.4.2高壓液相色譜測(cè)定

高壓液相色譜操作條件：流速1.1mL／min，紙速0.5cm／min，檢定器靈敏度為將10μg／mL標(biāo)準(zhǔn)液20uL調(diào)至滿刻度的70％一90％。在作高壓液相色譜時(shí)，首先用洗脫液平衡分析柱，從進(jìn)樣口裝置分別進(jìn)入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液與樣液各20uL。在米酵菌酸標(biāo)準(zhǔn)峰面積的直線范圍內(nèi)。將樣液與標(biāo)準(zhǔn)的峰面積相比以求出樣品中米酵菌酸的含量。米酵菌酸的保留時(shí)間為17min。

5.1.2.4.3計(jì)算

A1

X2=Cw----wVwD------……………………(2)

Sm2

式中：X2―米酵菌酸含量,μg／g

C――米酵菌酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，μg／mL；

A――樣液的峰面積；

s――米酵菌酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積；

v――加入甲醇溶解的體積，mL；

D――樣液的總稀釋倍數(shù)；

m2―甲醇溶解時(shí)相當(dāng)樣品的質(zhì)量，g。

5.1.2.4.4確證

如陽(yáng)性樣品還需用薄層色譜法中樣液與標(biāo)準(zhǔn)液點(diǎn)重疊的方法確證。

5.2鉛的測(cè)定

按照GB5009.12執(zhí)行。

5.3砷的測(cè)定

按照GB5009.11執(zhí)行。

5.4汞的測(cè)定

按照GB5009.17執(zhí)行