DB3311/T020。1
1范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了“慶元香菇”首發(fā)菌株種性研制標(biāo)準(zhǔn)和各級菌種的繁殖培養(yǎng)、生產(chǎn)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、檢驗方法和保藏、運輸條件。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于研制、生產(chǎn)、經(jīng)銷、使用“慶元香菇”菌種的單位和個人。
2定義
2.1香菇菌種
專指分類學(xué)名為Lentinulaedodes(Berk)Pegler，在生產(chǎn)性栽培中可長出符合市場需求，有經(jīng)濟效益子實體的純培養(yǎng)菌絲體。本標(biāo)準(zhǔn)中的香菇菌種均指雙核菌絲體。
2.2仿生菇菌種
由龍、慶、景原木砍花栽培的香菇子實體分離篩選或段木栽培的香菇菌種馴后用于“慶元香菇”培養(yǎng)料栽培的菌種。
2.3生產(chǎn)首發(fā)菌株
它是生產(chǎn)香菇各級菌種的原始出發(fā)菌株。菌株是引進的，必須經(jīng)有關(guān)部門驗收,并登記確認；菌株是選育的，必須經(jīng)有關(guān)部門驗收、鑒定，并經(jīng)省農(nóng)作物品種審定委員會審定或認定，登記確認。常以玻璃試管為容器進行培養(yǎng)和銷售。
2.4一級種
以首發(fā)菌種的菌絲體限額繁殖的菌種，常以玻璃試管為容器進行培養(yǎng)和銷售。由省主管部門審批，由具有一級種生產(chǎn)銷售許可證的單位限額供種。
2.5二級種
以一級種菌絲體繁殖的菌種，常以750ml透明的玻璃瓶或塑料瓶為容器進行培養(yǎng)和銷售。由具有一,二級種生產(chǎn)銷售許可證的單位或個人生產(chǎn)銷售。
2.6三級種
以二級種的菌絲體繁殖的菌種，常以透明的玻璃瓶或塑料薄膜袋為容器進行培養(yǎng)和銷售。由具有一,二,三級種生產(chǎn)銷售許可證的單位或個人生產(chǎn)銷售。
2.7雙核菌絲
亦稱異核體菌絲，指每個香菇菌絲細胞內(nèi)具有2個不同交配型的細胞核,它是可生長子實體的結(jié)實性菌絲。
2.8鎖狀聯(lián)合
香菇雙核菌絲在細胞分裂過程中出現(xiàn)的一種特殊形態(tài)，在顯微觀察時形狀恰似是一把鎖。它是香菇菌種具有出菇能力的形態(tài)指標(biāo)之一。
2.9菌絲生長速度
指香菇比核菌絲在23℃~25℃條件下的PDA培養(yǎng)基上每24h菌落直徑延伸的速度,以℃m/d表示。它是香菇菌種活力的檢測指標(biāo)這一。
2.10形態(tài)指標(biāo)
指香菇菌絲的外形和色澤等指標(biāo)。
2.11生理生化指標(biāo)
指香菇菌絲體和子實體生長發(fā)育時新陳代謝的各種生理生化檢測指標(biāo)，如溫度、含水量、光線、ph值、營養(yǎng)、呼吸量、酶的含量與變化等。
2.12栽培檢驗
指引進或選育的香菇菌種通過實際栽培而產(chǎn)生的效果檢驗。這是首發(fā)菌株供種前必定要檢驗的步驟。
2.13溫型
以香菇菌種出菇溫度范圍為指標(biāo)劃分的菌種類型?，F(xiàn)分為高溫型(15℃~25℃)，中溫型(10℃~20℃)，低溫型(5℃~15℃)和介于它們之間的若干類型。
2.14PDA培養(yǎng)基
指常用于首發(fā)菌株和一級種菌絲培養(yǎng)的葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基。
2.15對峙反應(yīng)
遺傳性狀不同的菌絲生長相遇時的拮抗現(xiàn)象.
2.16L是香菇學(xué)名Lentinula的縮寫.
2.17S是“孢子”英文名稱的Spore縮寫.
2.18T是“組織”英文名稱的Tissue縮寫。
2.19℃r是“雜交”英文名稱的℃ross縮寫.
3菌種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
3.1種性
種性是由品種的遺傳基因和環(huán)境條件共同決定的。香菇各級菌種的種性是由首發(fā)菌株的種性和環(huán)境條件決定的。必須使用種性清楚、性狀穩(wěn)定、經(jīng)有關(guān)部門鑒定驗收和省農(nóng)作物品種審定委員會或已登記備案的品種。
3.2首發(fā)菌株的種性
指作為生產(chǎn)性栽培用種的始發(fā)菌種的種性。主要的種性質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有形態(tài)區(qū)別指標(biāo)（如朵形大小、菌蓋厚薄、色澤深淺、菌柄的粗細長短等），栽培區(qū)別指標(biāo)（如產(chǎn)量、穩(wěn)定性、抗逆性等），生理生化區(qū)別指標(biāo)（如溫型、適應(yīng)性、生化指標(biāo)等）。不論是引進還是自選的首發(fā)菌株，供種前必須清楚該菌株的種性，并進行三組重復(fù)，每組300段以上栽培試驗，并取得穩(wěn)定的效果。一級種由經(jīng)審批、具備一級種生產(chǎn)許可證單位繁殖供應(yīng)。
3.3培養(yǎng)基配方
一級種PDA培養(yǎng)基配方：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂20g，水1000ml，ph值自然。二、三級菌種培養(yǎng)基配方：干雜木屑78%，麥麩20%，糖1%，熟石膏1%，含水量60%，ph值自然。
3.4菌種繁殖
二級種由一級種繁殖擴大而成，三級種由二級種繁殖擴大而成。每支一級種試管擴接4~6瓶二級種，每瓶750ml二級種擴接40~50瓶（袋）三級種。
3.5菌種培養(yǎng)
3.5.1溫度
23℃~25℃
3.5.2濕度
空氣相對濕度，60%~70%；培養(yǎng)基濕度，含水率60%左右。
3.5.3光線
暗或弱散射光、無直射陽光。
3.5.4空氣
保持通風(fēng)，空氣新鮮。
3.5.5培養(yǎng)期
在23~25℃條件下，一級種培養(yǎng)期為10~20天，二級種培養(yǎng)期35~40天，三級種培養(yǎng)期30～35天。
3.6菌種純度
3.6.1培養(yǎng)基滅菌
一級種PDA培養(yǎng)基必須9.8×10Pa，121℃滅菌45min。二級種木屑培養(yǎng)基必須10.4×10Pa，126℃滅菌2h，三級種木屑培養(yǎng)基必須126℃，10.4×10Pa滅菌2H或100℃后滅菌8~10h。
3.6.2保持種源純度
任何單位和個人不得更改引進、鑒定、登記注冊的菌種名和編號。
3.6.3菌絲純度
菌絲生長正常，色澤一致，無異色異味，無混入雜菌。
3.7菌絲外現(xiàn)形態(tài)指標(biāo)
菌絲白色，棉絮狀，在固體培養(yǎng)基上菌絲末端生長整齊，呈放射狀，均勻，一級種無黃水和褐色菌斑，有少量爬壁菌絲。成熟的二、三級木屑種色澤一致，木悄呈米黃色，有香菇特有的氣味，表面無或有少量褐斑、醬色分泌物，變溫刺激和光照后有少量原基出現(xiàn)。
3.8容器
一級種的容器為直徑15mm~20mm×150mm~200mm的透明玻璃試管，帶有松緊適宜的棉花塞，培養(yǎng)基與棉塞相距2℃m~3℃m；二級種容器為750ml透明玻璃瓶或相當(dāng)容量的塑料瓶；三級種為透明的玻璃瓶、塑料瓶或相當(dāng)容量的聚丙烯菌袋，均為松緊適宜的棉塞或套環(huán)、棉花塞。
3.9保藏期
在4℃條件下，一級種保藏期為3~4個月，二、三級種的保藏期為6~8個月；菌絲在隔氧的條件下（如液體石蠟隔氧保藏）保藏期為期1年；在-196℃的液氮中保藏期為3~5年或更長；液體菌種發(fā)酵期滿即使用。
3.10包裝和運輸
一、二級種出售時棉塞應(yīng)有滅菌過的牛皮紙包裹，菌袋間有適當(dāng)?shù)拈g隔；每支、瓶、袋菌種均有菌種標(biāo)簽，批量出售的菌種有種說明書；外包裝有防雨、防潮、防高溫、防摩擦、防重壓和易碎品的標(biāo)記。菌種在菌絲正常生長的溫度下非密閉包裝運輸，高溫季節(jié)夜間或氣調(diào)運輸。
3.11菌種標(biāo)志
除符合有關(guān)菌種規(guī)定外，還應(yīng)符合{菌種管理條例}有關(guān)格式，標(biāo)簽規(guī)格如下：
級別：AL―℃r
菌號：℃r―72
接種時間：
單位：
A代表一級種，B代表二級種℃r代表雜交種，T代表組織分離種，S代表孢子分離種。
4菌種質(zhì)量檢驗方法
4.1檢驗是香菇菌種的方法
4.1.1標(biāo)簽檢驗
核對菌種名稱、菌種編號、確認是香菇菌種和是已審定的菌株。
4.1.2外現(xiàn)目測菌絲檢驗
按本標(biāo)準(zhǔn)中3。7菌絲外觀形態(tài)指標(biāo)檢驗。
4.2檢驗香菇菌種是活體的方法
4.2.1生長現(xiàn)象檢驗
在無菌的條件下把菌絲移植于PDA或木屑培養(yǎng)基上，置于23℃~25℃溫度下培養(yǎng)，有生長現(xiàn)象。
4.2.2呼吸現(xiàn)象檢驗
將菌絲置于20℃以下的溫度培養(yǎng)，在菌絲上方的試管壁或玻璃瓶壁有水霧或水珠出現(xiàn)。
4.3菌種純度檢驗的方法
4.3.1目測檢驗
按本標(biāo)準(zhǔn)中3。6菌種純度和3。7菌絲外現(xiàn)形態(tài)指標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)檢驗。
4.3.2培養(yǎng)檢驗
按本標(biāo)準(zhǔn)中4。2。1生長現(xiàn)象檢驗的方法檢驗，無發(fā)現(xiàn)雜菌。
4.4活力檢驗的方法
4.4.1菌絲恢復(fù)生長檢驗
從4℃移至23℃~25℃條件下培養(yǎng)，48h內(nèi)恢復(fù)菌絲生長；在PDA培養(yǎng)基上置于23℃~25℃條件下培養(yǎng)，菌落直徑24h伸長0。5℃m以上。
4.4.2顯微檢驗
在顯微鏡下觀察，鎖狀聯(lián)合頻率高。
4.4.3呼吸量檢驗
用華勃氏呼吸儀或氧電極測試法，測定一定容量內(nèi)單位重菌絲生長空間氧分壓降低程度和℃O2排出量，耗氧量大、排出℃O2量多的菌種活力強，相反活力弱。
4.4.4酶活性檢測
酯質(zhì)同功酶、多酚氧化酶、纖維素酶、蟲漆酶等可作為檢驗菌種活力強弱的指標(biāo)之一。多酚氧化酶含量高的菌種是菌絲菌齡短、活力強的菌種；纖維素酶和蟲漆酶含量高的菌種是活力強、生物轉(zhuǎn)化率高的豐產(chǎn)菌種。
4.5菌種同拮抗檢驗
4.5.1菌絲拮抗檢驗
把不同來源的香菇菌絲接種在同一培養(yǎng)上，有對峙反應(yīng)的菌種是具有不同遺傳基因的菌種，沒有對峙反應(yīng)的是具有相同基因的菌種。
4.5.2同功酶測定
通過菌絲蛋白粹取后對蛋白質(zhì)中電泳層析酶譜的顯色，測出譜帶相似程度，以此檢驗菌種間的異同和遺傳特性和相似程度。這是菌種異同程度和是否新菌株的鑒別方法之一。
4.6菌種種質(zhì)特性分子標(biāo)志檢測
以各菌株細胞中染色體中遺傳表達結(jié)構(gòu)中的大小分子或分子基因為標(biāo)志，檢測菌種優(yōu)良程度，并限得該菌株標(biāo)志。常用的方法除同功酶譜測定外，還有電泳染色體組型脫氧核糖核酸（DNA）鑒定分析法、限制性片斷長度多態(tài)性（RFLP）分析法等。
