母種培養(yǎng)

　　母種培養(yǎng)是指用組織分離或孢子分離得到的菌種。母種培養(yǎng)基的制備通常用土豆洋菜培養(yǎng)基。配制1000毫升培養(yǎng)基，用土豆200克、瓊脂18-20克、葡萄糖20克。

　　做法:先將土豆洗凈去皮，切成蠶豆粒小塊，放入1000毫升水中煮沸30分鐘，用6-8層紗布過(guò)濾，補(bǔ)足損失水分。將瓊脂加入溶化后，加進(jìn)溶解的糖，補(bǔ)充水分至1000毫升。以后分裝試管，每管裝量1/5-1/4，并加棉塞、包紙。在1.2公斤壓力下滅菌30分鐘，趁熱擺成斜面。冷卻后置于25℃-27℃條件下觀察無(wú)雜菌即可接種。一支母種可轉(zhuǎn)管25-30支。

　　將無(wú)菌操作下接種的試管置于25℃左右恒溫條件下培養(yǎng)，半個(gè)月左右菌絲可長(zhǎng)滿試管。培養(yǎng)過(guò)程中應(yīng)注意除掉雜菌污染的試管。培養(yǎng)好的母種移入冰箱，在4℃條件下保存半年，或室溫下保存三個(gè)月。

　　原種培養(yǎng)

　　原料可用木屑或棉籽皮。木屑培養(yǎng)基配方:木屑78%，麥麩或米糠20%，糖1%，石膏1%。棉籽皮培養(yǎng)基配方:用50公斤棉籽皮加土豆浸出汁水3%，(1.5公斤土豆切成泥煮沸30分鐘的濾液)，糖0.1%，硫酸鎂0.1%。

　　做法:培養(yǎng)料加水拌均勻，濕度以用手緊握料，指縫內(nèi)見水珠而滴不下來(lái)為宜，一般料水比1:1.2-1.3。然后裝瓶，裝瓶方法是邊裝邊將瓶輕輕地抖動(dòng)，使瓶上下部緊密適中，裝至瓶肩部將料壓平，洗凈瓶口內(nèi)外的培養(yǎng)料，加棉塞包紙捆好放進(jìn)高壓消毒鍋內(nèi)進(jìn)行滅菌，在1.5公斤壓力下滅菌一小時(shí)。冷卻后，在無(wú)菌操作條件下接種。將試管中母種接入瓶中，一支母種可接4-5瓶原種，接種后置于25℃恒溫條件下培養(yǎng)一個(gè)月左右菌絲可長(zhǎng)滿瓶，即為原種。

　　栽培種培養(yǎng)

　　栽培種的制備實(shí)際上就是原種進(jìn)行一次擴(kuò)大培植。栽培種木屑培養(yǎng)基的配方同原種培養(yǎng)的配方。棉籽皮培養(yǎng)基的配方也同原種培養(yǎng)的配方。裝瓶后滅菌，在無(wú)菌條件下，把原種菌種接入栽培種瓶?jī)?nèi)。一瓶750毫升原種可接80-100瓶栽培種。接種后置于25℃恒溫條件下培育一個(gè)月左右，長(zhǎng)滿瓶后即可播種。在培養(yǎng)原種和栽培種時(shí)，接種后每隔2-3天要檢查一次，直至菌絲長(zhǎng)滿料面后每周檢查一次。揀出有雜菌污染的菌種，并遠(yuǎn)離培養(yǎng)室處理掉。