隨著食用菌產(chǎn)業(yè)的蓬勃發(fā)展，菌種需要量隨之增加，而現(xiàn)有菌種生產(chǎn)單位明顯偏少，許多菇農(nóng)不得不向外引種。長(zhǎng)途購(gòu)運(yùn)菌種不僅花費(fèi)大，成本高而且菌種因破瓶而易引起雜菌污染，從而嚴(yán)重影響栽培食用菌的經(jīng)濟(jì)效益。菇農(nóng)若能掌握菌種生產(chǎn)程序和制種技術(shù)，實(shí)行自行制種，逐步發(fā)展成制種專(zhuān)業(yè)戶，也是一項(xiàng)很好的致富門(mén)路。

　　菌種生產(chǎn)程序，通常分為母種、原種和栽培種3個(gè)層次，也就是通常所說(shuō)的一級(jí)、二級(jí)、三級(jí)菌種。其中母種的分離選育技術(shù)性強(qiáng)，要求精化；而原種和栽培種的制作則比較簡(jiǎn)單。下面介紹各級(jí)菌種的制作技術(shù)。

　　一、母種的分離選育

　　母種主要采用人工選擇、誘變育種、雜交育種和原生質(zhì)融合等手段獲得。作為一般制種專(zhuān)業(yè)戶，可以采用人工選擇方式分離培育母種，具體步驟與操作方法如下。

　　1、采集種源 從野生成人工栽培群體中，選擇有代表性的優(yōu)良菇體作為種源。種菇的標(biāo)準(zhǔn)是：八成熟，朵形圓正、肉質(zhì)肥厚，無(wú)病蟲(chóng)害。采集1--2朵符合上述標(biāo)準(zhǔn)的種菇編上號(hào)碼，作為分離母種的材料。從栽培室采集的應(yīng)標(biāo)有原菌株代號(hào)。

　　2、培養(yǎng)基配制 瓊脂培養(yǎng)基又叫PDA培養(yǎng)基，常用配方為：馬鈴薯200--250克，瓊脂15--20克，葡萄糖20--25克，清水1000毫升。也可以加硫酸鎂1--1．5克，維生素B1微量，磷酸二氫鉀2--3克。先將馬鈴薯洗凈去皮，切成薄片，置于鋁鍋內(nèi)加水煮沸30分鐘，撈起后用4層紗布過(guò)濾，取汁。然后將瓊脂加入汁內(nèi)，邊加熱邊攪拌，讓瓊脂充分溶化；再將葡萄糖等加入，稍煮幾分鐘后，同樣用4層紗布過(guò)濾，取其汁液。將汁液趁熱裝入玻璃試管內(nèi)。裝至管長(zhǎng)的1／5，管口用棉花塞緊，或?qū)⒅貉b入玻璃三角瓶?jī)?nèi)，裝量20毫升。然后置于高壓鍋內(nèi)，在98--108千帕／厘米的壓力下滅菌30分鐘左右。滅菌后及時(shí)取出，趁熱將試管斜排于桌上，冷卻后即成為固體斜面培養(yǎng)基。

　　3、母種分離方法 有孢子彈射、組織分離和基內(nèi)分離3種方法。①孢子彈射法。將種菇表面消毒，吸干水分后，將菇體懸掛于裝有瓊脂培養(yǎng)基的三角瓶?jī)?nèi)，讓菇體內(nèi)的袍子自然散落在培養(yǎng)基上萌發(fā)菌絲。也可以剪取一小決菇體，貼附在試管斜面培養(yǎng)基表面，讓孢子散落在培養(yǎng)基上萌發(fā)菌絲，即能獲得母種；③組織分離法。將消毒過(guò)的種菇，在接種箱內(nèi)用手從菇柄處對(duì)半解開(kāi)，或用刀片切開(kāi)，使菇體形成對(duì)開(kāi)。在菌蓋和菌柄交界處或菌褶處，用接種刀切取一小塊菇體，然后縱切成5毫米x10毫米的小薄片，用接種針挑取一塊薄片，接入斜面培養(yǎng)基的中央，每支試管接種一小決薄片，待其萌發(fā)菌絲，即可得到母種；(3)基內(nèi)分離法。選擇已長(zhǎng)菇的木段，削去樹(shù)皮及表層木質(zhì)部，用70％的酒精消毒后，鋸成1厘米厚的薄片，放入0．1％的升汞水中消毒1--2分鐘，再用滅菌水洗去殘液。然后再將小薄片劈成0．5--1厘米寬的小條，接入斜面培養(yǎng)基中央，待長(zhǎng)出菌絲后即得母種。也可以在已長(zhǎng)菇的菌袋中，經(jīng)消毒處理后，用接種針鉤取袋內(nèi)色澤純、長(zhǎng)勢(shì)旺的菌絲體，接種在試管斜面培養(yǎng)基中央，待萌發(fā)菌絲后，同樣獲得菌種。

　　4、適溫培養(yǎng) 通過(guò)上述不同方式將菌種分離接種于試管后，要及時(shí)將試管移入已消毒的培養(yǎng)箱或培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，溫度控制在25℃左右，使分離獲得的孢子或菌絲在適溫下發(fā)育。一般孢子彈射3--4天后孢子萌發(fā)成菌落，10天后菌絲長(zhǎng)滿管；組織分離接種后2--3天，菌絲即萌發(fā)，并在培養(yǎng)基上蔓延生長(zhǎng)；菇木分離接種后，7天菌絲即恢復(fù)生長(zhǎng)。

　　5、選育提純 通過(guò)上述方法得到的菌絲，不一定都是優(yōu)質(zhì)的，還需要選育提純。因此，在菌絲萌發(fā)后，要認(rèn)真觀察，挑選色澤純、健壯、長(zhǎng)勢(shì)正常、無(wú)間斷的菌絲，在接種箱內(nèi)連同培養(yǎng)基鉤取菌絲，接入另備的試管培養(yǎng)基上。在23--25℃的恒溫條件下，培養(yǎng)7--10天，待菌絲長(zhǎng)滿管后，再進(jìn)行觀察，從中擇優(yōu)取用，即為“母代”母種。

　　6、轉(zhuǎn)管擴(kuò)接 母代母種可以轉(zhuǎn)管擴(kuò)接成“子代”母種。采用同樣的斜面培養(yǎng)基，每支可擴(kuò)接30--50支子代母種。生產(chǎn)上供應(yīng)的多為子代母種。它可以再次轉(zhuǎn)管擴(kuò)接。一般每支可擴(kuò)接成20--25支子代母種，但轉(zhuǎn)管次數(shù)不得超過(guò)5次。

　　7、出菇試驗(yàn) 分離選育的母種，還必須進(jìn)行出菇試驗(yàn)。方法是：把母種接種于瓶或袋裝的木屑培養(yǎng)基上，根據(jù)各種菇耳種性對(duì)溫度的要求，進(jìn)行適溫培養(yǎng)，直至出菇才證實(shí)可用于生產(chǎn)。

　　二、原種繁殖培養(yǎng)

　　將母種接在瓶或袋的木屑培養(yǎng)基上，通過(guò)培養(yǎng)，即成原種。其技術(shù)要求如下。

　　1、原種木屑培養(yǎng)基配方 雜木屑77．5％，麥麩20％，蔗糖1％，石膏粉1．2％，硫酸鎂0．3％。pH值(滅菌前)6．5--7，含水量調(diào)至60％。

　　將上述原、輔料混合拌勻，裝入750毫升的玻璃菌種瓶?jī)?nèi)，裝料要求下松上緊。瓶口塞緊棉花，再用牛皮紙包住瓶頸與棉塞。然后置于高壓滅菌鍋內(nèi)，在147千帕／平方厘米壓力下滅菌2--2．5小時(shí)。也可進(jìn)行常壓滅菌，在100℃下保持10--11小時(shí)，達(dá)標(biāo)后趁熱取出，讓其冷卻。

　　2、接入菌種 待料溫降至25℃以下時(shí)，在滅菌條件下，將試管種分割成若干決，通過(guò)酒精燈火焰迅速接入原種培養(yǎng)基上，每支母種可按4--6瓶原種。

　　3、發(fā)菌培養(yǎng) 接種后及時(shí)將玻璃菌種瓶移入25℃菌種培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)。空間相對(duì)濕度控制在70℃以上，避免強(qiáng)光照射。原種培養(yǎng)時(shí)間一般菇類(lèi)需要40--50天，草菇、銀耳只需15--20天即可。

　　4、去雜選優(yōu) 原種培育過(guò)程中，要每天進(jìn)行觀察，如發(fā)現(xiàn)有雜菌污染的，應(yīng)立即淘汰。

　　三、栽培種擴(kuò)大培育

　　將原種再次擴(kuò)接在同樣的木屑培養(yǎng)基上，在適溫條件下培養(yǎng)30--35天即為栽培種（又叫生產(chǎn)種），可用于生產(chǎn)栽培。栽培種可用750毫升菌種專(zhuān)用瓶，由于使用量大，所以通常多采用聚丙烯菌種袋。袋的規(guī)格有12厘米x24厘米、15厘米x28厘米、17厘米x33厘米等，可根據(jù)各種菇耳特性和當(dāng)?shù)亓?xí)慣選擇使用。培養(yǎng)基滅菌采用常壓滅菌灶滅菌，要求滅菌溫度達(dá)100℃，保持8--10小時(shí)，達(dá)標(biāo)后趁熱卸袋冷卻。待料溫降至25℃以下時(shí)，在無(wú)菌條件下接入選定品種的原種。每瓶原種可擴(kuò)接成50--60瓶栽培種。菌種培育室要求干凈，防強(qiáng)光，室溫掌握在23--25℃，并經(jīng)常檢查，發(fā)現(xiàn)雜菌污染應(yīng)及時(shí)淘汰，不斷選優(yōu)去劣。當(dāng)菌絲長(zhǎng)滿袋，尖端菌絲反轉(zhuǎn)上爬1--3厘米時(shí)，為適齡的栽培種。