陳俏彪　 吳應淼　 葉長文　

摘　要：以香菇主栽菌株"慶元9015"為母本,選出優(yōu)良變異株"慶科20",該菌株具有獨特的PCR擴增條帶和蛋白電泳圖譜,與"慶元9015"等菌株具有明顯的遺傳差異.該菌株春栽鮮菇單產(chǎn)比"慶元9015"和"241-4"分別增加7.7%和16.5%;秋栽鮮菇單產(chǎn)比"慶元9015"和"Cr02"分別增加3.3%和18.9%;花菇栽培平均單產(chǎn)比"135"增加20.7%.

關(guān)鍵詞：香菇;選育;變異;高產(chǎn);優(yōu)質(zhì)

分類號：S646.120.31 　文獻標識碼：A

文章編號：1005-9873(2005)04-0045-05

我國是香菇生產(chǎn)大國和香菇出口大國，篩選和推廣香菇良種是香菇產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的關(guān)鍵。香菇主栽菌株“241-4”、“慶元9015”、“135”等隨著栽培年限的增長相繼出現(xiàn)種性退化、產(chǎn)量品質(zhì)降低等趨勢，香菇生產(chǎn)急需優(yōu)良的替代菌株。浙江省慶元縣食用菌科研中心繼選育出香菇當家菌株“241-4”和“慶元9015”后2000年3月又成功選育出高產(chǎn)、高抗、優(yōu)質(zhì)、高效的香菇新菌株“慶科20”，它克服了“慶元9015”菌柄過長、連體叢生等不足，并適宜作高棚層架栽培花菇和低棚脫袋栽培普通菇。該菌株于2005年2月通過了省級品種認定（認定編號：浙認菌2005001）。

1 材料與方法

1.1“慶科20”母本選擇

母本為慶元縣香菇（Lentinula edodes）主栽菌株“慶元9015”。

1.2供試菌株

供試香菇菌株“慶元9015”、“241-4”、“135”、“Cr02”、“66”、“868”和“南花103”等由慶元縣食用菌科研中心保藏提供。

1.3選育方法

1997年，慶元縣食用菌科研中心從“慶元9015”栽培場采集到23只菇柄短、單生、長勢好的子實體，經(jīng)組織分離→拮抗試驗→出菇試驗→品比試驗→穩(wěn)定性觀察→生物學特性、栽培特性研究，選擇采種順序為“20”的菌株進行中試推廣。2000年將該菌株定名為“慶科20”。

1.4實驗室篩選

挑選菌柄短的菇體進行純種分離，并進行菌絲拮抗試驗、菌絲耐溫培養(yǎng)、菌絲長勢和形態(tài)觀察等試驗，剔除菌絲長勢弱的株系。

1.5栽培篩選

1.5.1 初篩

所獲菌株按常規(guī)培養(yǎng)料配方（雜木屑78%、麥麩20%、紅糖1%、石膏粉1%,含水量55-60％）進行出菇試驗，淘汰菌柄過長、子實體有叢生、產(chǎn)量過低的株系。

1.5.2 復篩

所獲菌株按常規(guī)培養(yǎng)料配方（同1.5.1）進行品比試驗。從品質(zhì)、產(chǎn)量、菌柄等性狀進行比較篩選，淘汰性狀不穩(wěn)定遺傳的株系。

1.5.3中型生產(chǎn)試驗

1999～2000年在慶元縣及其毗鄰的龍泉、景寧及福建省的松溪、政和、壽寧等縣市高（800～1200m）、中（500～800m）、低（300～500m）三種不同海撥高度分別設點進行產(chǎn)量鑒定和品比試驗，接種期安排在春季，出菇后抽樣進行評價分析。

1.6 PCR擴增條帶分析

PCR擴增條帶分析采用CTAB/NaCl法[1.2]提取香菇菌株全基因組DNA。PCR擴增采用PX2(美國Thermo Hybaid公司)MJ梯度PCR儀，反應所需的dNTP、Tap酶、PCR緩沖液和隨機引物S375均由上海生物工程公司提供。。

1.7蛋白電泳分析

蛋白電泳分析采用垂直平板聚丙烯酰胺凝膠電泳法(PAGE)，譜帶遷移率（Rf值）計算參照文獻[3]介紹的方法。

2 結(jié)果與分析

2.1 生物學特性

2.1 .1形態(tài)特征

“慶科20”菌株孢子印白色，菌絲密集濃白，子實體單生，朵型圓整，菌蓋表面顏色較淡，為淡褐色，含水量高時顏色較深，菌蓋直徑2.0～7.0cm，菌肉組織致密，厚0.5～1.5cm，菇柄直且短，長2.8～4.0cm，直徑0.8～1.3cm；菌褶整齊、較致密，呈輻射狀排列，易開膜，條件適宜時易形成花菇。

2.1.2 拮抗試驗結(jié)果

菌絲拮抗試驗顯示，“慶科20”與“241-4”、“135”、“Cr02”有明顯的拮抗作用，與“慶元9015”無明顯拮抗作用。表明“慶科20”是一個與“241-4”、“135”屬不同品系的菌株，但與“慶元9015”具有較近的親緣關(guān)系。

2.1.3 PCR擴增條帶分析結(jié)果

1=“66”

2=“868”

3=“慶元9015”Qingyuan9015

4=“慶科20”Qingke 20

5=“241-4”

圖1 5個香菇菌株的PCR擴增條帶圖譜

Fig.1 PCR amplification band pattern of five Lentinula edodes strains

“慶科20”、“慶元9015”、“241-4”、“66”、“868”5個菌株的PCR擴增條帶表明（圖1），“慶科20”具有與其它參試菌株不同的帶型，與“慶元9015”等具有明顯的遺傳差異。

2.1.4蛋白電泳分析結(jié)果

1=“241-4”

2=“慶科20”Qingke 20

3=“慶元9015”Qingyuan9015

圖2 3個香菇菌株蛋白電泳圖譜

Fig.2 The protein electrophoretic profile of three Lentinula edodes strains

從圖2中可以看出3個菌株具有各自獨特的電泳圖譜，“慶科20”和“慶元9015”均有17條蛋白帶，但有明顯不同之處，而“241-4”擁有20條蛋白帶，“慶科20”與“慶元9015”等菌株具有明顯的遺傳差異。

2.2栽培特性

2.2.1栽培特性

“慶科20”菌株屬中低溫型中熟菌株。菌絲體生長適溫為22～27℃，出菇適宜溫度8～22℃，最適14～18℃， 9月下旬～翌年5月出菇，子實體單生，其分化和發(fā)生需一定的晝夜溫差刺激；適宜接種期2～7月份，最適為3～5月，不同接種期菌棒的出菇期、香菇產(chǎn)量無明顯差異，但冬菇率、折干率等會隨接種期提前而提高。

2.2.2菌株抗逆性

“慶科20”、“慶元9015”、“南花103”、“135”4個的進行接種成活率和菌棒成品率對比試驗表明，“慶科20”與“慶元9015”、“南花103”的接種成活率和菌棒成品率比較高，而“135”菌株的接種成活率和菌棒成品率明顯低于其它3個菌株。

2.2.3栽培與產(chǎn)量表現(xiàn)

經(jīng)過1997～2000年3個產(chǎn)季的初篩、復篩和中型生產(chǎn)試驗表明，“慶科20”栽培性狀穩(wěn)定、產(chǎn)量高、品質(zhì)優(yōu)、商品性好、抗性較強、適應性廣，適宜高棚層架栽培花菇和低棚脫袋栽培普通菇。表1數(shù)據(jù)表明，“慶科20”比“慶元9015”和“241-4”袋單產(chǎn)分別提高3.9％和21.5%，產(chǎn)值分別提高14.3％和18.6%?！皯c科20”具有適應性廣，穩(wěn)定性強和高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的特點。

表1 不同海拔高度中試結(jié)果

Table 1 Comparison table of different elevation pilot experiment

海拔高度Elevation(m) 菌株Strains 單產(chǎn)Per bag yield（g） 產(chǎn)值value(Yuan /Per bag) 生物效率Bioefficiency（%）

300～500 慶科20Qingke 20 90 2.99 113

9015 84 2.62 105

241-4 77 2.57 96

500～800 慶科20Qingke 20 97 3.16 121

9015 95 2.72 119

241-4 79 2.58 99

800～1200 慶科20Qingke 20 101 3.21 126

9015 98 2.85 123

241-4 81 2.74 101

2.2.3.1春季栽培試驗結(jié)果 春季栽培試驗（接種日期為4月13日）結(jié)果為“慶科20”、“慶元9015”、“241-4”的生物效率分別為141％、131％、121％，“慶科20”生物效率比“慶元9015”和“241-4”分別高7.7%和16.5%。顯著性分析[4]表明，“慶科20”的生物效率顯著高于“慶元9015”和“241-4”。

2.2.3.2秋季栽培試驗結(jié)果 秋季栽培試驗（接種日期為8月24日）結(jié)果為“慶科20”秋栽生物效率為118%，比“慶元 9015”和“Cr02”分別高3.3%和18.9%。顯著性分析[4]表明，“慶科20”的生物效率與“慶元9015”無顯著差異，但“慶科20”與“慶元9015”的生物效率都顯著高于“Cr02”。

2.2.3.3花菇栽培試驗結(jié)果 花菇栽培試驗結(jié)果顯示，“慶科20”花菇單產(chǎn)239g/袋，比“慶元9015”、“135”、“南花103”分別高9.1％、20.7%、46.6％。花菇率以“135”的45.4％最高，“慶科20”次之，為44.7％，“慶元9015”和“南花103”的花菇率則分別為42.4％和37.9％。盡管“135”的花菇率比“慶科20”高，但其產(chǎn)出少。試驗結(jié)果表明，“慶科20”適合花菇栽培，且綜合表現(xiàn)優(yōu)于“慶元9015”、“135”、“南花103”。

2.2.3.4花菇形成速度

“慶科20”和“135”花菇形成速度觀察測試結(jié)果表明，在連續(xù)5d晴朗、適度通風的條件下，“慶科20”和“135”的菇蕾在割口[5]培養(yǎng)60~70h后，菇蓋表面均形成深淺不一的白色裂紋，兩個菌株在花菇的形成速度上不存在明顯差異。

試驗還發(fā)現(xiàn)“慶科20”菌株已形成白色花紋的花菇，受環(huán)境濕度變化的影響沒有“135”菌株明顯?？諝鉂穸雀?5%以上時，“慶科20”花菇的花紋能保持較長時間，而 “135”菌株的花菇蓋面會很快轉(zhuǎn)為棕紅色，裂紋逐步消失。

2.3子實體質(zhì)量

2.3.1子實體形態(tài)

“慶科20” 朵型圓整，菌蓋中等，菇柄短而中空，畸形菇少，菌蓋占總菇重的85.2％，比“慶元9015”、“241-4”、“Cr02”的菌蓋占總菇重分別高6.4％、0.8％、3.9％，可見“慶科20”菌株更適于生產(chǎn)剪柄菇?！皯c科20”菌株每潮菇的菇體大小較“慶元9015”、“241-4”和“Cr02”均勻，而3個菌株的菇體大小相對就參差不齊。

2.3.2子實體品質(zhì)

通過對“慶科20”、“慶元9015”、“241-4”、“Cr02”4個菌株的香菇子實體的含水量、干鮮比、收縮率、肉質(zhì)疏密、食用口感、保鮮期進行比較，“慶科20”菌株的子實體含水量88.3%、干鮮比1:8.7、收縮率31.0%、肉質(zhì)致密、食用口感鮮嫩、保鮮期較長，“慶元9015”、“241-4”與“慶科20”的上述特征較為接近，而“Cr02”較差（含水量90.5%、干鮮比大、收縮率38.6%、肉質(zhì)疏松、食用口感略差、保鮮期相對偏短）。

2.3.3花菇質(zhì)量比較

表2數(shù)據(jù)表明，“慶科20”菌株的白花菇比重大，質(zhì)量品位好，達到“135”水平，明顯優(yōu)于“慶元9015”和“南花103”，適宜進行花菇栽培。

表2 各等級花菇[5]比例 (%)

Table 2 The statistics of variety figured mushroom rate(%)

菌株Strains 天白花菇White figuredmushroom 茶花菇Fulvous figuredmushroom 傘花菇Opening figured mushroom

135 27.2 54.2 18.6

慶科20Qingke 20 28.5 50.8 20.7

9015 20.4 51.0 28.6

南花103Nanhua 103 21.3 48.6 30.1

3 討論

3.1“慶科20”是一個具有區(qū)別于親本和其他供試菌株的PCR擴增條帶、蛋白電泳圖譜的香菇新菌株。

3.2“慶科20”菌株子實體朵型圓整、菇蓋平整，組織致密，食用口感鮮嫩，含水量低，折干率高，菇柄短而中空，畸形菇少。

3.3 “慶科20”栽培性狀穩(wěn)定、產(chǎn)量高、品質(zhì)優(yōu)、商品性好、抗性較強、適應性廣，易形成花菇，花菇率高，適宜作高棚層架栽培花菇和低棚脫袋栽培普通菇。

Studies on Selection and Breeding of "Qingke 20"-- A New Strain of Lentinula edodes

Chen Qiaobiao Wu Yingmiao Ye Changwen

（Science & Research Center of Edible Fungi QingYuan, Zhejiang , 323800, P.R.China）

ABSTRACT: Using the main cultivation strain of Lentinula edodes Qingyuan 9015 as the start strain, a good quality variation strain QingKe 20 was breeded. This strain showed specific PCR amplification band and protein electrophoretic profile, which showed significantly genetic difference with other strains such as Qingyuan 9015 et al. Per bag yield of spring cultivated fresh mushroom was increased 7.7% and 16.5% than Qingyuan 9015 and 241-4. Per bag yield of autumn cultivated fresh mushroom was increased 3.3% and 18.9% than 9015 and Cr02. Average per bag yield of figured mushroom cultivated fresh mushroom was increased 20.7% than 135.

KEY WORDS: Lentinula edodes, Breeding, Variation, High yield, High quality

作者簡介：陳俏彪(1963-),男,1987年畢業(yè)于浙江農(nóng)業(yè)大學植物保護專業(yè),高級農(nóng)藝師,主要從事食用菌栽培與育種研究,發(fā)表主筆論文3篇,出版論著3部.

作者單位：陳俏彪（浙江省慶元縣食用菌科研中心,浙江,慶元,323800）　

　　　　　吳應淼（浙江省慶元縣食用菌科研中心,浙江,慶元,323800）　

　　　　　葉長文（浙江省慶元縣食用菌科研中心,浙江,慶元,323800）　

參考文獻：

[1]Borroso G,Perennes D,Labarere J.A miniprep method for RFLP analysis and dsRNAs detection perfected in the cutivated fungus Agrocybe aegerita [C].Science and Cultivation of Edible Fungi,1995,87～94.

[2]Ausubel FM,Brent R,Kingston RE,et al.Current protocols in molecular biology[J].New York:Greene Publishing and Wiley-Interscience,1993,66～ 67.

[3]胡能書,萬賢國.同工酶技術(shù)及其應用[M].長沙:湖南科學技術(shù)出版社,1985.

[4]南京農(nóng)業(yè)大學主編.田間試驗與統(tǒng)計分析[M].北京:農(nóng)業(yè)出版社,1993.

[5]吳學謙.香菇生產(chǎn)全書[M].中國農(nóng)業(yè)出版社,2005.332,400.

食用菌學報 2005年第4期 No.10