2.1.3 栽培

　　人工栽培時(shí)掌握溫度：孢子彈射時(shí)30℃，菌絲體生長(zhǎng)20-28℃，10-20℃形成菌核，14-25℃形成子座，26-32℃長(zhǎng)出地面。濕度控制：菌絲體生長(zhǎng)60%-70%相對(duì)濕度，10%-20%形成菌核，孢子彈射、子座形成及長(zhǎng)出蟲草以60%一80%為宜。光照控制：孢子萌發(fā)和菌絲生長(zhǎng)不需光照，但從無性階段到有性階段，需一定程度的散射光，刺激長(zhǎng)出于座。另外，只需小量空氣即可。pH以5-6為宜。 2.2 人工栽培 即栽培的各個(gè)環(huán)節(jié)均在人為條件下完成，冬蟲夏草的人工栽培，包括種子液制備、場(chǎng)地選擇及栽培3個(gè)步驟。

　　2.2.1 種子液制備

　　懸浮液的配方為：馬鈴薯200g，磷酸二氫鉀3 g，硫酸鎂1.5 g，維生素10mg，增產(chǎn)靈0.5 mg。將孢于接種后，于24-28℃下培養(yǎng)。

　　2.2.2 場(chǎng)地選擇

　　室外栽培選擇土壤疏松、含沙量較大、通氣良好的地方作栽培場(chǎng)，室內(nèi)栽培用木板作成多層床架，上鋪7 cm沙土，濕度保持在40%，用樹葉鋪蓋。

　　2.2.3 接種培養(yǎng)

　　接種時(shí)間選蝙蝠蛾幼蟲發(fā)育到二齡時(shí)進(jìn)行，在陰天或太陽下山后，用微型噴霧器噴到幼蟲體上。6-7月后，即可看到子座頂端露出土面。也可用瓶子等裝菜園土栽培。 我國(guó)沈南英(1985)把蟲草頭孢菌接種于特殊培養(yǎng)基一肉水500mL、水解蛋白5g、酵母1 g、葡萄糖30g、磷酸二氫鉀1g、蒸餾水400mL，長(zhǎng)出了顏色、形態(tài)與冬蟲夏草一樣的子座。四川中藥研究所在產(chǎn)區(qū)康定，調(diào)查樣方1 000余個(gè)，采集樣本1 200余份，觀測(cè)幼蟲20多萬頭，實(shí)驗(yàn)1 500余次，終于用康定蟲草菌接種人工飼養(yǎng)的貢嘎蝙蝠蛾幼蟲，成功地完成世代繁衍，人工培養(yǎng)出冬蟲夏草。

　　3 冬蟲夏草的液體深層發(fā)酵

　　由于天然蟲草嚴(yán)格的寄生性以及特殊的生態(tài)環(huán)境，故其產(chǎn)量很低，資源緊缺。市場(chǎng)供需脫節(jié)，價(jià)格高昂，大約6 000元/kg，目前市場(chǎng)出售約10 000元/kg以上。利用液體深層發(fā)酵培養(yǎng)冬蟲夏草菌絲體、提取物或發(fā)酵液，是解決冬蟲夏草藥源的一種有效途徑。實(shí)驗(yàn)表明，人工發(fā)酵培養(yǎng)得到的菌絲，經(jīng)毒理、藥理、植化研究，證明與天然蟲草化學(xué)組成、藥理作用基本一致，可代替天然蟲草生產(chǎn)蟲草制品，以彌補(bǔ)自然資源的短缺。據(jù)食用菌生物技術(shù)1989年國(guó)際會(huì)議報(bào)道，蟲草菌絲體液體培養(yǎng)產(chǎn)率最高可達(dá)4%左右。 據(jù)報(bào)道，國(guó)內(nèi)有30多個(gè)單位的科學(xué)工作者在進(jìn)行冬蟲夏草的人工培養(yǎng)及采用其無性階段的發(fā)酵物，代替野生冬蟲夏草的研究方面已取得較為理想的結(jié)果。尚德靜等通過對(duì)冬蟲夏草的深層發(fā)酵條件，如pH、培養(yǎng)溫度、接種量、轉(zhuǎn)速及對(duì)深層發(fā)酵培養(yǎng)基碳氮源和無機(jī)鹽的篩選，確定了其最佳發(fā)酵條件為24℃、200 r/min、pH 5.0、接種量5%-15%，菌絲生長(zhǎng)的最佳碳源為葡萄糖，最佳氮源為蛋白胨和氨基酸復(fù)合粉，最佳無機(jī)鹽為磷酸二氫鉀、硫酸鎂和氯化鈣。 江曉路、葛蓓蕾對(duì)一株北蟲草苗Y3的液體深層發(fā)酵條件進(jìn)行了研究，確定了以土豆汁 20%、蛋白胨8‰、蔗糖20‰、磷酸氫二鉀1.5 ‰為主的發(fā)酵培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件為：溫度25-26℃，轉(zhuǎn)速125 r/min，接種量5%，搖床振蕩培養(yǎng)4～5 d。獲得了菌絲平均得率為1.8%的較高水平。 李信、許雷、裴鑫德采用二次回歸通用旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計(jì)方法，對(duì)蛹蟲草菌絲體液體發(fā)酵培養(yǎng)基的最佳組合進(jìn)行了研究，建立了培養(yǎng)基的反應(yīng)模型，并用實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)驗(yàn)證了數(shù)學(xué)模型，對(duì)培養(yǎng)基最佳優(yōu)化組合的各種因子、影響產(chǎn)量的反應(yīng)規(guī)律及交互作用進(jìn)行了探討，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行了蛹蟲草菌絲體液體發(fā)酵條件的研究。結(jié)果表明，蛹蟲草菌絲體液體發(fā)酵的最適條件為：接種量為6%，發(fā)酵初始pH 7.0，培養(yǎng)基裝量100 mL/500 mL三角瓶，發(fā)酵溫度24～28℃，發(fā)酵周期96 h。 張長(zhǎng)凱等對(duì)蟲草菌絲生長(zhǎng)的深層培養(yǎng)條件進(jìn)行了詳細(xì)的研究，篩選出蟲草菌絲深層培養(yǎng)的最優(yōu)條件：葡萄糖1.5%，麥芽汁1%，蛋白胨1%，酵母膏 0.5%，pH 6.0，溫度23℃，接種量5%-10%，搖床轉(zhuǎn)速80-90 r/min。 陳傳盈等為提高冬蟲夏草深層培養(yǎng)干菌粉得率、蛋白質(zhì)和甘露醇含量，對(duì)其培養(yǎng)條件進(jìn)行了研究，試驗(yàn)表明，6%的白糖、2%的蠶蛹粉、1%的酵母粉和0.3%的2號(hào)無機(jī)鹽添加劑等組成的液體培養(yǎng)基，可獲得干菌粉得率4%-5%，粗蛋白含量>43%，甘躇醇含量>8%。 鐘士清通過發(fā)酵條件研究得出，其發(fā)酵生長(zhǎng)適宜溫度為26-28℃，適宜pH值在5～7之間，接種量以5%(體積與體積比)為佳。30h后菌絲達(dá)最高生長(zhǎng)量：27.7g菌絲體干重/L。整個(gè)發(fā)酵過程中，對(duì)發(fā)酵通氣量要求不高。 張顯恥、何道珍探索出發(fā)酵工藝為：原種-搖床培養(yǎng)-一級(jí)培養(yǎng)-二級(jí)培養(yǎng)個(gè)三級(jí)培養(yǎng)-四級(jí)培養(yǎng)-菌液分離-干燥。具體結(jié)果為：①搖床培養(yǎng)：接種量為一支試管菌落接一個(gè)三角瓶(250 mL/1 000 mL)，轉(zhuǎn)速100 r/min。初期培養(yǎng)液棕紅，無氣泡產(chǎn)生，隨培養(yǎng)進(jìn)行，色漸變淺呈棕黃，繼續(xù)培養(yǎng)又呈棕黑，肉眼可觀察灰白色菌絲，鏡檢可見菌絲片段和分生孢子發(fā)芽形成的菌絲。這階段為15 d左右。②一級(jí)培養(yǎng)：接種量為8%-10%，前3 d壓力為0.2～0.3 kg/cm2，以后壓力逐漸增大，第5 d肉眼可見翻騰的小顆粒比原料略多，氣泡占液面的50%，8 d后壓力升至0.5-0.6kg/cm2。10d后停止通氣，測(cè)得菌液比達(dá)70%。終止培養(yǎng)，菌絲球結(jié)構(gòu)緊密，表面光滑，色灰白。③二、三、四級(jí)培養(yǎng)：培養(yǎng)情況和一級(jí)大體相似，但培養(yǎng)時(shí)間明顯縮短，為7-8 d。