為進一步探討香菇菌多糖的作用機理,我們進行了香菇菌多糖對免疫功能的影響及抗腫瘤實驗,現(xiàn)總結(jié)如下:
一、材料與方法:
1、香菇菌多糖注射液:針劑,每支2ml/4mg,;
2、實驗動物:昆明種小鼠,蘭州生物制品研究所動物室提供,C57/BL小鼠由甘肅省腫瘤研究所動物室提供。二組小鼠雌雄兼有,體重為17-22克;
3、瘤株:肝癌(Hep),腦瘤(B22),艾氏腹水癌(EC),肉瘤180(S180)分別由上海藥物所和北京藥物所引來,在甘肅省腫瘤研究所動物室傳代半年以上。
4、試劑及其他材料:植物血凝素(PHA),環(huán)磷酰胺,肝素鈉注射液,Hanks溶液,戊二醛混合液,活小牛血清,綿羊紅細胞懸液,雞紅細胞懸液,瑞姬染液,甲醇及生理鹽水等。
5、給藥劑量及途徑:小鼠隨機分組,試驗組每日皮下注射香菇菌多糖注射0.2ml/0.4ml,連續(xù)5天停藥1天,于第7天作實驗觀察各項免疫指標。同時設空白對照組,鹽水對照組,PHA對照組??鼓[瘤試驗給藥劑量為6.6mg/kg,腹腔注射(ip),連續(xù)給藥10天,并設環(huán)磷酰胺為陽性對照。
6、實驗方法:巨噬細胞吞噬功能的測定按參考文獻進行;E玫瑰花結(jié)形成實驗按參考文獻進行;淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗按體內(nèi)法進行??鼓[瘤實驗,按1979年全國抗抗癌協(xié)會制定“抗腫瘤藥物體內(nèi)篩選規(guī)程”進行。
二、實驗結(jié)果:1、香菇菌多糖對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能的影響:見表1。從表1結(jié)果可見,香菇菌多糖組小鼠腹腔巨噬細胞吞噬指數(shù)與空白對照組及生理鹽水對照組有顯著差異。說明香菇菌多糖可以提高小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能。
表1 香菇菌多糖對巨噬細胞吞噬功能的影響
組別 | X±SX(n) | T | P |
空白對照組 | 21.70±0.497(10) | 14.359 | <0.001 |
生理鹽水對照組 | 24.20±0.917(10) | 15.614 | <0.001 |
香菇菌多糖組 | 42.75±0.770(10) |
2、香菇菌多糖對小鼠E玫瑰花結(jié)形成的影響:見表2。從表2說明,香菇菌多糖能增強小鼠外周血E玫瑰花結(jié)的形成,與空白對照及生理鹽水對照組相比,有顯著差異。
表2 香菇菌多糖對小鼠E玫瑰花結(jié)形成的影響
組別 | X±SX(n) | T | P |
空白對照組 | 36.00±0.874(11) | 15.623 | <0.001 |
生理鹽水對照組 | 24.20±1.129(11) | 22.850 | <0.001 |
香菇菌多糖組 | 42.75±0.684(11) |
3、香菇菌多糖對淋巴細胞轉(zhuǎn)化的影響,見表3。香菇菌多糖能促進小鼠體內(nèi)淋巴細胞轉(zhuǎn)化,與空白對照及生理鹽水對照組比較有顯著差異。與PHA組比較,無顯著性意義。說明小鼠體內(nèi)淋巴細胞轉(zhuǎn)化率的提高,是香菇菌多糖作用的結(jié)果,并非是PHA刺激作用的結(jié)果。
表3 香菇菌多糖對小鼠淋巴細胞轉(zhuǎn)化的影響
組別 | X±SX(n) | T | P |
空白對照組 | 19.50±3.36(10) | 7.228 | <0.01 |
PHA對照組 | 38.90±2.97(10) | 1.607 | <0.05 |
生理鹽水對照組 | 30.10±1.79(10) | 4.067 | <0.01 |
香菇菌多糖組 | 46.18±3.38(10) |
4、香菇菌多糖對小鼠移植瘤Hep及B22等瘤株的作用,見表4。表4表明香菇菌多糖對瘤株B22抑制率為42%,對Hep的抑制率為11.57-43.16%之間,對EC的抑制率為14.80%,S180的抑制率為2%,陽性對照組環(huán)磷酰胺對Hep抑制率是65.07%。香菇菌多糖對Hep的抑制率與給藥劑量有關(guān),當5-6.6mg/kg時的抑制率在35.78-43.06%之間,劑量增大到10mg/kg對Hep的抑制率為11.57-11.96%。香菇菌多糖組與陽性對照組環(huán)磷酰胺(CY)組比較,CY的抑制率更顯著,但在實驗終了時,香菇菌多糖組小組體重增加,CY組小鼠體重明顯減輕。說明香菇菌多糖除對腫瘤細胞的生長有抑制作用外,還有強壯身體的作用。
表4 香菇菌多糖對小鼠移植性腫瘤的作用
樣品名稱 | 瘤株 | 劑量 mg/kg |
給途徑及次數(shù) | 動物數(shù) | 動物體重/克 | 瘤重(克)/生存天數(shù)(天) | 抑瘤率 (%) |
P | 備注 | |||
開始 | 結(jié)束 | 開始 | 結(jié)束 | |||||||||
給藥/ 對照 |
給藥/ 對照 |
給藥/ 對照 |
給藥/ 對照 |
治療 | 對照 | |||||||
香 菇 菌 多 糖 |
B22 | 6.6 | ipX10 | 10/10 | 9/8 | 20.5/20.4 | 25.5/26.0 | 0.478±0.557 | 0.6275±0.638 | 42.24 | <0.05 | 提前給藥5天 |
Hep | 6.6 | ipX10 | 10/10 | 8/9 | 20.4/20.4 | 18.0/26.4 | 0.75±0.27 | 1.24±0.41 | 38.42 | |||
Hep | 6.6 | ipX10 | 10/12 | 9/12 | 21.1/25.0 | 23.8/21.9 | 0.65±0.25 | 1.07±0.57 | 39.42 | <0.05 | ||
Hep | 10 | ipX10 | 10/15 | 10/13 | 21.4/32.4 | 21.4/23.4 | 0.97±0.21 | 1.10±0.32 | 11.96 | |||
Hep | 6.6 | ipX10 | 10/12 | 10/11 | 22.2/26.3 | 20.8/26.8 | 1.03±0.57 | 2.03±1.11 | 35.78 | 停藥一周處理 | ||
Hep | 5.0 | ipX10 | 10/13 | 9/12 | 23.6/36.6 | 25.6/23.5 | 0.79±0.28 | 1.39±0.59 | 43.06 | <0.02 | 提前5天給藥 | |
Hep | 10 | ipX10 | 10/10 | 8/9 | 23.1/22.7 | 33.5/28.5 | 0.70±0.26 | 0.79±0.25 | 11.57 | |||
Hep | 6.6 | ipX10 | 10/10 | 8/9 | 23.1/22.7 | 33.5/28.5 | 0.85±0.27 | 1.40±0.58 | 39.42 | 停藥5天處理 | ||
EC | 5.0 | ipX10 | 10/13 | 8/10 | 21.6/27.4 | 25.0/26.8 | 0.98±0.53 | 1.16±0.52 | 14.87 | |||
S180 | 10 | ipX10 | 10/12 | 9/11 | 21.8/26.2 | 27.0/26.1 | 2.3±1.003 | 2.35±0.95 | 2.0 | |||
CY | Hep | 30 | ipX10 | 9/10 | 8/8 | 19.0/19.2 | 17.2/21.0 | 0.388 | 1.112 | 65.07 | <0.001 |
三、討論
經(jīng)小鼠免疫功能實驗,香菇菌多糖有顯著提高巨噬細胞吞噬作用,有顯著提高小鼠外周血E玫瑰花形成和體內(nèi)淋巴細胞轉(zhuǎn)化,表明香菇菌多糖有提高機體免疫力的作用。