菌種分母種、原種和栽培種,通常也稱一級種、二級種、三級種,其培育方法各異,其技術(shù)要點如下:
一、母種培養(yǎng):
培養(yǎng)母種是指用組織分離或孢子分離得到的菌種。母種培養(yǎng)基的制備通常用土豆洋菜培養(yǎng)基。配制1000毫升培養(yǎng)基,用土豆200克,瓊脂18-20克,葡萄糖20克。
做法:先將土豆洗凈去皮,切成蠶豆粒小塊,放入1000毫升水中煮沸30分鐘,用6-8層沙布過濾,補(bǔ)足損失水分。將瓊脂加入溶化后,加進(jìn)溶解的糖,補(bǔ)充水分至1000毫升。以后分裝試管,每管裝量1/5-1/4,并加棉塞、包紙。在1.2公斤壓力下滅菌30分鐘,趁熱擺成斜面。冷卻后置于25℃-27℃條件下觀察無雜菌即可接種。一支母種可轉(zhuǎn)管25-30支。在無菌操作下接種的試管置于25℃左右恒溫條件下培養(yǎng),半個月左右菌絲可長滿試管。培養(yǎng)過程中應(yīng)注意除掉雜菌污染的試管。培養(yǎng)好的母種移入冰箱,在4℃條件下保存半年,或室溫下保存三個月。
二、原種培養(yǎng):
原種培養(yǎng)原料可用木屑或棉籽皮。木屑培養(yǎng)基配方:木屑78%、麥麩或米糠20%、糖1%、石膏1%。棉籽皮培養(yǎng)基配方:用50公斤棉籽皮加土豆浸出汁水3%(1.5公斤土豆切成小塊煮沸30分鐘的濾液)、糖0.1%、硫酸鎂0.1%。
做法:培養(yǎng)料加水拌均勻,培養(yǎng)料的濕度以用手緊握料,指縫內(nèi)見水珠,而滴不下來為宜,一般料水比1:1.2-1.3。然后裝瓶,裝瓶方法是邊裝邊將瓶輕輕地抖動,使瓶上下部緊密適中,裝至瓶肩部將料壓平,洗凈瓶口內(nèi)外的培養(yǎng)料,加棉塞包紙捆好放進(jìn)高壓消毒鍋內(nèi)進(jìn)行滅菌,在1.5公斤壓力下滅菌一小時。冷卻后,在無菌操作條件下接種。將試管中母種接入瓶中,一支母種可接4-5瓶原種,接種后置于25℃恒溫條件下培養(yǎng)一個月左右菌絲可長滿瓶,即為原種。
三、栽培種培養(yǎng):
栽培種的制備實際上就是原種進(jìn)行一次擴(kuò)大養(yǎng)殖。栽培種木屑培養(yǎng)基的配方同原種培養(yǎng)的配方。棉籽皮培養(yǎng)基的配方也同原種培養(yǎng)的配方。裝瓶后滅菌,在無菌條件下,把原種菌種接入栽培種瓶內(nèi)。一瓶750毫升原種可接80-100瓶栽培種。接種后置于25℃恒溫條件下培育一個月左右,長滿瓶后即可播種。在培養(yǎng)原種和栽培種時,接種后每隔2-3天要檢查一次,直至菌絲長滿料面后每周檢查一次。揀出有雜菌污染的菌種,并遠(yuǎn)離培養(yǎng)室處理掉。