第五節(jié)　菌種質(zhì)量鑒定與復(fù)壯

一、菌種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

１、一級(jí)種（俗稱母種）：在同一種培養(yǎng)基上具有原菌株的菌落形態(tài)特征，無病蟲雜菌，菌絲潔白，生長(zhǎng)健壯有力，邊緣整齊，不發(fā)黃，不老化，菌齡掌握在剛長(zhǎng)滿斜面即用于擴(kuò)接原種或繼代培養(yǎng)。

２、二級(jí)種（俗稱原種）：無感染病蟲雜菌，菌絲潔白，粗壯濃密，均勻布滿瓶周，外見顏色一致，無不均勻斑，培養(yǎng)基由棕黑色轉(zhuǎn)為淡棕黃色，有蘑菇特有香味，菌絲不萎縮，不發(fā)黃，接種后應(yīng)在40-50天長(zhǎng)滿瓶,菌齡掌握在菌絲長(zhǎng)滿瓶10天左右使用。

３、三級(jí)種（俗稱栽培種）：無感染病蟲雜菌，菌絲潔白玉米黃，粗壯有力，均勻布滿瓶周，外觀顏色大體一致，無明顯不均勻斑，培養(yǎng)基成淡棕黃色，有蘑菇特有香味，培養(yǎng)基不萎縮，不吐黃水，接種后菌絲應(yīng)在30-45天長(zhǎng)滿瓶,菌齡掌握在菌絲長(zhǎng)滿瓶后15天內(nèi)使用。

二、菌種質(zhì)量鑒定：

１、直接觀察　首先用肉眼觀察包裝是否合乎要求，棉塞有無松動(dòng)，試管、玻璃瓶或塑料袋有無破損，棉塞和試管、瓶或袋中有無病蟲侵染，菌絲色澤是否潔白均勻，有無發(fā)生老化。然后在瓶塞邊作深吸氣，聞是否具有蘑菇菌種特有的香味，原種和栽培種可取出小塊菌絲體觀察其顏色和均勻度，并用手指捏料塊檢查含水量是否符合標(biāo)準(zhǔn)。

２、顯微鏡檢查　在載玻片上滴一滴蒸餾水，然后挑取少許菌絲置水滴上，讓菌絲體充分展開，蓋好蓋玻片，再置顯微鏡下觀察。也可通過菌絲體染色后鏡檢觀察。蘑菇菌絲體應(yīng)粗壯，菌絲節(jié)較長(zhǎng)，呈分枝狀，說明是正常菌種，如果菌絲節(jié)很短，分枝很濃密，菌絲較纖細(xì)，生長(zhǎng)緩慢，一般為不正常菌種。

３、菌絲生長(zhǎng)速率測(cè)定

　　將所獲的菌種，轉(zhuǎn)接至PDA 培養(yǎng)皿中央, 待菌絲身皿邊輻射蔓管時(shí), 用直徑0.5cm的打孔器,經(jīng)滅菌后打取邊緣菌絲,邊同培養(yǎng)基重新接入PDA 培養(yǎng)皿中央進(jìn)行培養(yǎng),每隔24小時(shí),測(cè)定菌落直徑,直至菌落覆蓋全皿為止,從而耱出菌絲平均生長(zhǎng)速度。

４、耐高溫測(cè)定

　　先將母種試管數(shù)支置于24℃下培養(yǎng),10天后取出部分試管置30℃下培養(yǎng),24小時(shí)后再放回24℃下培養(yǎng),經(jīng)過高溫的處理,如果菌絲仍然健壯,旺盛生長(zhǎng),則表明該菌種具有耐較高溫度的優(yōu)良特性,也可將母種試管移接至草基試管培養(yǎng)基中,置24℃下培養(yǎng)5天正常生長(zhǎng)后,把試管置28℃下進(jìn)行培養(yǎng), 如果菌絲能較正常生長(zhǎng)也表明該品種具有耐較高溫度的優(yōu)良特性。

５、 吃料能力鑒定　將試管母種接入新鮮配制的裝在試管中的糞草培養(yǎng)基中， 置24℃下進(jìn)行培養(yǎng),5天后觀察菌絲生長(zhǎng)情況,如果菌種塊能很快萌發(fā),并迅速向培養(yǎng)料中生長(zhǎng)伸展,則說明該品種的吃料能力強(qiáng);如果菌種萌發(fā)后生長(zhǎng)緩慢, 遲遲不向四周和料層深處伸展,則表明該品種對(duì)培養(yǎng)料的適應(yīng)能力差,是劣質(zhì)菌種。

６、生理特征測(cè)定　蘑菇菌種的生理特征測(cè)定包括酶活力測(cè)定和遺傳分析兩方面。酶活力測(cè)定主要是進(jìn)行纖維素酶活力的測(cè)定，遺傳分析主要是進(jìn)行酯酶同工酶的檢測(cè)，以及RAPD檢測(cè)等,分析該品種的遺傳物質(zhì)是否保持原有品種的特征帶,如果遺傳分析發(fā)現(xiàn)主要標(biāo)記酶帶或擴(kuò)增帶發(fā)現(xiàn)變異說明該品種有可能出錯(cuò)或已發(fā)生變異, 是劣質(zhì)菌種。

三、菌種的退化與復(fù)壯

１、菌種的退化

　　菌種在傳代過程中，因遺傳物質(zhì)發(fā)生變異而引起的使原有的優(yōu)良性狀漸漸消失或變壞，出現(xiàn)長(zhǎng)勢(shì)差、出菇遲、產(chǎn)量不高、質(zhì)量不好、子實(shí)體叢生等現(xiàn)象。這些現(xiàn)象人們泛稱為“退化”?！巴嘶笔且粋€(gè)群體概念，即栽培中子實(shí)體群體中有少數(shù)子實(shí)體與親本不同，不能算退化，只有相當(dāng)一部分乃至大部分個(gè)體的性狀都明顯變劣，群體生長(zhǎng)性能顯著下降時(shí)，才能視為菌種退化。菌種退化往往是一個(gè)漸變的過程，菌種退化只有在發(fā)生有害變異的個(gè)體在群體中顯著增多以至占據(jù)優(yōu)勢(shì)時(shí)才會(huì)顯露出來。因此盡管個(gè)體的變異可能是一個(gè)瞬時(shí)的過程，但菌種呈現(xiàn)“退化”卻需要較長(zhǎng)的時(shí)間。

２、菌種發(fā)生退化的原因

（１）菌種混雜　在菌種繼代培養(yǎng)過程中，不同品種間交叉感染，導(dǎo)致不同品種的菌絲體混雜在一起，菌絲生長(zhǎng)發(fā)生變異，導(dǎo)致原有品種生產(chǎn)性狀的改變，常常表現(xiàn)出產(chǎn)量下降、質(zhì)量變劣等。

（２）有害突變的發(fā)生　一般來說，一個(gè)正常菌株經(jīng)過多代移植，不會(huì)導(dǎo)致遺傳性狀的改變。但是如果一個(gè)菌株的菌絲細(xì)胞中發(fā)生有害突變，而且突變體能適應(yīng)外界環(huán)境條件。那么，隨著移接次數(shù)的增加，有害突變體在菌絲細(xì)胞群中所占的比例會(huì)逐漸增大。這樣，該菌株的生產(chǎn)性能就會(huì)隨之惡化，退化現(xiàn)象就逐漸顯現(xiàn)出來。

（３）雜交菌株的雙親核比例失調(diào)　雜交菌株的菌絲體在轉(zhuǎn)管過程中，受到外界環(huán)境、營(yíng)養(yǎng)條件等改變的影響，其中一個(gè)親本的核發(fā)育正常逐漸占據(jù)優(yōu)勢(shì)而另一親本的核可能不適應(yīng)而逐漸減弱，這樣導(dǎo)致雙核比例的失調(diào)，隨著擴(kuò)管代數(shù)的增加，核比例失調(diào)逐漸擴(kuò)大，最終導(dǎo)致在栽培中表現(xiàn)出退化現(xiàn)象。

（４）病毒的感染　菌種感染病毒后，病毒不僅會(huì)隨著菌絲體的擴(kuò)大繁殖而增加，而且會(huì)通過帶毒孢子傳染下一代。當(dāng)菌種攜帶一定濃度的病毒粒子，在栽培中都會(huì)表現(xiàn)出明顯減產(chǎn)，菇質(zhì)量下降等退化現(xiàn)象。

四、防止菌種退化的措施

（１）要防止菌種的混雜，在菌種轉(zhuǎn)管，進(jìn)行出菇試驗(yàn)等工作中，均應(yīng)加強(qiáng)品種隔離，減少品種間的混雜，以保證優(yōu)良品種的遺傳組成在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)能保持足夠的穩(wěn)定。

（２）控制菌種傳代次數(shù)　菌種傳代次數(shù)越多，產(chǎn)生變異的機(jī)率就越高，因此菌種發(fā)生退化的概率就會(huì)越多，生產(chǎn)中應(yīng)嚴(yán)格控制菌種的移接代數(shù)。

（３）采用有效的菌種保藏方法保存菌種　菌種保存應(yīng)是短期、中期和長(zhǎng)期三者相結(jié)合，根據(jù)不同的要求從不同保藏方法中進(jìn)行擴(kuò)和移接，確保菌種能長(zhǎng)期保持該品種的原有優(yōu)良性狀。

（４）創(chuàng)造菌種生長(zhǎng)良好營(yíng)養(yǎng)條件和外界環(huán)境　菌種培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)條件應(yīng)適宜，才能使菌種生長(zhǎng)健壯，減少退化的發(fā)生。營(yíng)養(yǎng)不足和過于豐富對(duì)菌種生長(zhǎng)均不利。菌種的生長(zhǎng)繁殖受到物理、化學(xué)、生物等外界條件的影響，如條件適宜，菌種生長(zhǎng)正常，不易退化，不相適宜，則會(huì)引起菌種的退化。比如芳香族化合物，能誘發(fā)絨毛狀菌絲體成扇形菌落的形成，這種菌絲體在料床上易形成致密的白斑，導(dǎo)致產(chǎn)量下降。

（５）對(duì)菌種可能遭受病毒的感染應(yīng)保持足夠的警惕。對(duì)有疑問的菌種要及時(shí)檢驗(yàn)。確證已感染病毒，尤其是病毒粒子含量大，菌絲體及子實(shí)體性狀已受到嚴(yán)重影響的菌種，應(yīng)及時(shí)淘汰。

４、菌種的復(fù)壯

（１）菌絲尖端分離進(jìn)行提純復(fù)壯，在顯微鏡下應(yīng)用顯微操作器把菌絲尖端切下轉(zhuǎn)移至新瓶的PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)，這樣可以保證該菌種的純度， 并且可以起到脫病毒的作用，使菌種保持原有品種的遺傳物質(zhì)，恢復(fù)原來的生活力和優(yōu)良種性，達(dá)到復(fù)壯的目的。

（２）適當(dāng)更換培養(yǎng)基，長(zhǎng)期在同一培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)的菌種，生活力可能逐漸下降。將碳源、氮源、碳氮比、維生素、礦物質(zhì)營(yíng)養(yǎng)作適當(dāng)調(diào)整，對(duì)因營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)不適而衰退的菌種，有一定的復(fù)壯作用。

（３）菌種分離，要有計(jì)劃的把無性繁殖和有性繁殖的方法交替使用，反復(fù)進(jìn)行無性繁殖菌種會(huì)不斷衰退，而經(jīng)有性繁殖所產(chǎn)生的孢子，是食用菌生活史的起點(diǎn)，具有豐富的遺傳特性，因此必須定期進(jìn)行蘑菇菌株的單孢分離篩選，從中優(yōu)選出具有該品種原來優(yōu)良性狀的新菌株，逐漸替代舊菌株，這樣就可不斷地使該品種得到恢復(fù)，長(zhǎng)期使用。