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    銀耳菌種的制作


    【發(fā)布日期】:2010-07-14
          把分離提純后的銀耳菌絲和香灰菌絲單獨(dú)分開(kāi)培養(yǎng)于試管中(詳細(xì)的分離方法請(qǐng)瀏覽:銀耳菌種的分離技術(shù)一文)。生產(chǎn)母種時(shí),先取出銀耳菌絲,并擴(kuò)大到所需要的管數(shù)。然后放在25℃培養(yǎng)到銀耳菌落直徑約lcm左右。此時(shí),再在每支長(zhǎng)了銀耳菌絲的試管中,接種極少量香灰菌絲,待兩者長(zhǎng)在一起時(shí),就可以出售或用于原種生產(chǎn)了。
            如先接香灰菌絲,因香灰菌絲生長(zhǎng)快,很快覆蓋斜面,并很快消耗養(yǎng)料,其后接上的銀耳菌絲就不易生長(zhǎng)。
      若香灰菌絲和銀耳菌絲同時(shí)接種在一支試管中,同樣會(huì)出現(xiàn)銀耳菌絲少、香灰菌絲數(shù)量多的缺陷。
      因此,生產(chǎn)銀耳母種(試管種)時(shí)一定要注意接種的先后,以及注意控制兩者的比例。
      制作銀耳菌種有必要了解銀耳及其“伴生菌”香灰菌絲的關(guān)系:
      在可以人工種植的食藥用中,屬于這種類(lèi)型的菌目前僅有銀耳和金耳。它們子實(shí)體的形成,銀耳除了要有純銀耳菌絲外,還必須有“伴生菌”即香灰菌的幫助;金耳除了要有純金耳菌絲外,還必須有粗毛硬革菌的幫助,兩者缺一不可。在一般條件下,銀耳和金耳的純菌絲體生長(zhǎng)相當(dāng)緩慢,分解木質(zhì)素、纖維素能力極弱,分別要依賴(lài)于香灰菌絲和粗毛硬革菌絲分解基質(zhì),提供它們生長(zhǎng)發(fā)育所需的養(yǎng)分,否則便不可能形成子實(shí)體。所以在擴(kuò)繁銀耳、金耳母種時(shí),必須將兩種相應(yīng)的菌絲體,移接在同一培養(yǎng)基上進(jìn)行混合培養(yǎng)?,F(xiàn)以銀耳為實(shí)例介紹兩種菌絲混合制種技術(shù):
      1、斜面母種混接法
      取純銀耳菌絲試管母種和新配制的PDA斜面試管各一支,連同接種器具一起放入接種室(箱)中,按無(wú)菌操作進(jìn)行轉(zhuǎn)接,即挑取米粒大小、帶培養(yǎng)基菌種一塊,移接于空白試管斜面培養(yǎng)基上,加棉塞后置22-24℃下恒溫培養(yǎng)6-8天。當(dāng)銀耳菌絲長(zhǎng)至似繡球狀如黃豆大小時(shí),再連同香灰母種一起移入接種室(箱)里,按無(wú)菌操作用接種鏟在距銀耳純菌絲團(tuán)約2厘米處,接入一小塊香灰菌絲母種,培養(yǎng)2天在接種塊上便可見(jiàn)到白色菌絲,7天左右即形成白毛團(tuán)而覆蓋銀耳純菌絲團(tuán),12-15天在白毛團(tuán)的上方可見(jiàn)到有紅、黃色水珠即為成功。
      需要指出,用銀耳與香灰菌的斜面混合母種擴(kuò)接原種時(shí),應(yīng)切去斜面的前后端,只取其繡球狀的銀耳純白菌絲及附近黑灰色的香灰菌絲用于轉(zhuǎn)接。因此1支斜面母種只能接1瓶原種。
      2、瓶裝木屑原種混接法
      如果沒(méi)有銀耳純菌絲,將銀耳孢子培養(yǎng)出芽孢母種,再接入瓶裝木屑培養(yǎng)基制成的香灰菌母種,混合培養(yǎng)而成。
      根據(jù)接種需要量,按1支香灰斜面母種擴(kuò)接12-15瓶木屑培養(yǎng)基的比例,將香灰菌母種試管和經(jīng)滅菌的瓶裝木屑培養(yǎng)基,以及接種用的器具,一起放入接種箱里,按無(wú)菌操作,用接種鏟挑取黃豆大小的香灰菌母種一塊,接入木屑培養(yǎng)基瓶中。接種完畢,移至24-26℃下培養(yǎng),約經(jīng)2天即可見(jiàn)到接種塊上萌發(fā)白色菌絲。此后要隔天檢查,發(fā)現(xiàn)雜菌及時(shí)檢出剔除。一般培養(yǎng)11天左右,香灰菌絲可向培養(yǎng)基內(nèi)延伸約3厘米,此時(shí)可觀察到培養(yǎng)基表面有灰褐色或黑褐色的分泌物,這表明香灰菌絲生長(zhǎng)旺盛,應(yīng)及時(shí)接入銀耳芽孢母種。
      按1:12-15的比例,取銀耳芽孢母種試管和培養(yǎng)好的木屑培養(yǎng)基香灰菌母種;一起放入接種室(箱)中,按無(wú)菌操作,用無(wú)菌接種刀劃破香灰菌絲表層,再用無(wú)菌接種鏟挑取少量銀耳芽孢,接入香灰菌絲體中?;旌虾髮⑵恳浦?3-25℃下培養(yǎng),經(jīng)10天左右即可見(jiàn)到銀耳芽孢接種處生長(zhǎng)濃白色菌絲。再培養(yǎng)18天左右即出現(xiàn)紅、黃色水珠,25天左右便可觀察到有扭結(jié)狀子實(shí)體原基,說(shuō)明培養(yǎng)成功。1瓶這樣的木屑混合種可擴(kuò)接30-40瓶原種(二級(jí)種)。
      栽培種的生產(chǎn)
      根據(jù)原種生長(zhǎng)的好壞,耳基大小,銀耳菌絲“吃料”的深度,來(lái)決定每瓶原種應(yīng)擴(kuò)接的瓶數(shù)。為了保證質(zhì)量,盡量控制在40-60瓶之內(nèi)。如果原種能攪拌得很均勻,使銀耳菌絲和香灰菌絲混合得很均勻,每瓶原種也可能接100-200瓶種植種。
      注意事項(xiàng)
      要生產(chǎn)出優(yōu)良的銀耳菌種,除了注意上述的各項(xiàng)要求,如無(wú)菌操作之外,還必須注意如下幾個(gè)方面:
      1. 生物專(zhuān)一性
      銀耳菌絲和香灰菌絲配合也有專(zhuān)一性。因此,為了生產(chǎn)有效的銀耳菌種,我們必須從同一塊耳木上分別獲得銀耳的純培養(yǎng)(包括酵母狀分生孢子或銀耳菌絲)和純的香灰菌絲。不同地區(qū)或同一地區(qū)不同耳木(樹(shù)種)上得來(lái)的銀耳菌絲和香灰菌絲不能隨便調(diào)換,隨意組合。否則,就有造成衰敗的可能性。經(jīng)調(diào)換和組合的效果,必須根據(jù)銀耳菌絲在木屑培養(yǎng)基中定植的情況,以及耳基形成的大小,開(kāi)片的情況來(lái)判斷。凡是銀耳菌絲能繼續(xù)生長(zhǎng),形成耳基和順利開(kāi)片的,便可以繼續(xù)擴(kuò)大并用于生產(chǎn),否則就不能使用。
      2. 接種比例
      根據(jù)銀耳菌絲生長(zhǎng)較慢,香灰菌絲生長(zhǎng)很快這一個(gè)特點(diǎn),在純的混合培養(yǎng)時(shí),必須注意銀耳菌絲和香灰菌絲的接種比例。為了達(dá)到控制兩者的接種比例,采用先培養(yǎng)銀耳菌絲,后配香灰菌絲的辦法,最為理想。如果說(shuō)銀耳菌絲的接種比例應(yīng)達(dá)到1000:1也不算過(guò)份的(銀耳菌絲發(fā)展到直徑約1cm,其內(nèi)有成千上萬(wàn)條菌絲,只要配上幾條香灰菌絲就可以了)。否則,銀耳菌絲很少,香灰菌絲占絕對(duì)優(yōu)勢(shì),將來(lái)就不會(huì)出耳或出耳率很低。若采用在香灰菌絲中加人酵母狀分生孢子的方法來(lái)生產(chǎn)菌種的話(huà),那么銀耳酵母狀分生孢子的數(shù)量是很大的,每毫升培養(yǎng)液中銀耳酵母狀分生孢子的個(gè)數(shù)可達(dá)10億-100億個(gè)。在香灰菌絲生長(zhǎng)的木屑培養(yǎng)基中加入酵母狀分生孢子液,因酵母狀分生孢子分散在木屑顆粒中不集中,而且不是所有的酵母狀分生孢子都能萌發(fā)成菌絲。因此,用此法生產(chǎn)銀耳菌種,效果不很理想,若得不到銀耳菌絲,可以把銀耳酵母狀分生孢子集中地涂在長(zhǎng)了香灰菌絲的木屑培養(yǎng)基表面,這樣銀耳酵母狀分生孢子比較容易萌發(fā)。
      3. 培養(yǎng)條件
      銀耳純菌種(酵母狀分生孢子或銀耳菌絲)的培養(yǎng)條件和銀耳原種、種植種(混合培養(yǎng))的培養(yǎng)條件是有一些不同的。因此,必須注意混合培養(yǎng)的條件,使銀耳菌絲和香灰菌絲都能適應(yīng)同一培養(yǎng)基,同一培養(yǎng)條件。例如將溫度控制在20-28℃范圍之內(nèi)(最好是23-25℃)。原種的含水量控制在65%,種植種的含水量控制在65%-70%之間。因?yàn)樵N培養(yǎng)基稍干,有利于銀耳菌絲的生長(zhǎng),不易產(chǎn)生酵母狀分生孢子,有利于擴(kuò)大為種植種;而種植種稍濕一些,有利于酵母狀分生孢子的產(chǎn)生和繁殖,此孢子液滲入木屑培養(yǎng)基深處,和香灰菌絲均勻混合,可以彌補(bǔ)銀耳菌絲“吃料”不深只長(zhǎng)在表層的缺陷,使出耳率更高,更穩(wěn)定。
      還必須根據(jù)每一瓶原種耳基生育的狀況,來(lái)確定該原種是否可以擴(kuò)大為種植種,以及每瓶應(yīng)擴(kuò)大幾瓶種植種。凡是混合培養(yǎng)后,能使銀耳酵母狀分生孢子萌發(fā),銀耳菌絲能繼續(xù)生長(zhǎng),形成耳基,耳基能不斷長(zhǎng)大的組合,都是有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值的菌種。原種經(jīng)嚴(yán)格挑選,凡耳基大,銀耳菌絲生長(zhǎng)多(吃料深的),香灰菌絲粗壯有力,攪拌后擴(kuò)接的瓶數(shù)就多。反之,就不應(yīng)擴(kuò)大為種植種。為了更加保險(xiǎn)起見(jiàn),每瓶以擴(kuò)大40-60瓶為宜。總之,必須使每一瓶新接種的培養(yǎng)基都有銀耳菌絲和香灰菌絲,或酵母狀分生孢子和香灰菌絲?;蛘甙言N攪拌之后,塞上棉花塞再培養(yǎng)3-5天,使攪斷的銀耳菌絲再生新的菌絲,這樣才能保證種植種的質(zhì)量。
      4. 提純復(fù)壯
      為防止菌種因長(zhǎng)期使用,生活力降低,出現(xiàn)耳片發(fā)黃,不易開(kāi)片,再生力差的毛病。根據(jù)生產(chǎn)的方式選用不同菌齡、不同生理成熟度的銀耳菌株。如段木種植時(shí),應(yīng)選菌齡小,成熟度低,銀耳氣生菌絲一白毛團(tuán)旺盛,不易膠質(zhì)化的菌株;瓶栽時(shí),應(yīng)選菌嶺大,成熟度高,白毛團(tuán)小,容易膠質(zhì)化并易開(kāi)片的菌株。香灰菌絲應(yīng)選爬壁力強(qiáng),羽毛狀分枝長(zhǎng)的,分解木材能力強(qiáng)的菌株作為段木種植的菌株,而代料種植時(shí),香灰菌絲要稍“弱化”一些的菌株才好,否則滿(mǎn)瓶、滿(mǎn)袋都是香灰菌絲,有限的營(yíng)養(yǎng)都被香灰菌絲消耗掉,銀耳反而長(zhǎng)不大。
      原種貯藏的時(shí)間太長(zhǎng),耳基很大,培養(yǎng)基的養(yǎng)料消耗過(guò)甚,菌種的生活力已衰退,應(yīng)棄之不用。否則使用效果還不如適齡的種植種再擴(kuò)大培養(yǎng)的菌種。
      5. 母種保存
      母種應(yīng)貯藏在4-15℃的冰箱中。每1-3個(gè)月移植一次。原種若不馬上使用,也應(yīng)保存在低溫、干燥的場(chǎng)所。種植種滿(mǎn)瓶后至45天之內(nèi)就應(yīng)盡早地種下去。
      銀耳純菌種長(zhǎng)期單獨(dú)保藏,所長(zhǎng)的子實(shí)體有變黃的趨勢(shì);而和“香灰”菌絲混合培養(yǎng),并經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期保藏,子實(shí)體較不易變黃。為了得到雪白的銀耳,菌種應(yīng)從色澤潔白的銀耳(野生的或家生的)中進(jìn)行采種。保種3年以上就應(yīng)注意色澤的問(wèn)題。
     
     
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