食用菌種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
1、一級種(母種):在同一種培養(yǎng)基上具有原菌株的菌落形態(tài)特征,無病蟲雜菌,菌絲潔白,生長健壯有力,邊緣整齊,不發(fā)黃,不老化,菌齡掌握在剛長滿斜面即用于擴(kuò)接原種或繼代培養(yǎng)。
2、二級種(原種):無感染病蟲雜菌,菌絲潔白,粗壯濃密,均勻布滿瓶周,外見顏色一致,無不均勻斑,培養(yǎng)基由棕黑色轉(zhuǎn)為淡棕黃色,有蘑菇特有香味,菌絲不萎縮,不發(fā)黃,接種后應(yīng)在40-50天長滿瓶,菌齡掌握在菌絲長滿瓶10天左右使用。
3、三級種(栽培種):無感染病蟲雜菌,菌絲潔白玉米黃,粗壯有力,均勻布滿瓶周,外觀顏色大體一致,無明顯不均勻斑,培養(yǎng)基成淡棕黃色,有蘑菇特有香味,培養(yǎng)基不萎縮,不吐黃水,接種后菌絲應(yīng)在30-45天長滿瓶,菌齡掌握在菌絲長滿瓶后15天內(nèi)使用。
食用菌種質(zhì)量鑒定
1、直接觀察
首先用肉眼觀察包裝是否合乎要求,棉塞有無松動,試管、玻璃瓶或塑料袋有無破損,棉塞和試管、瓶或袋中有無病蟲侵染,菌絲色澤是否潔白均勻,有無發(fā)生老化。然后在瓶塞邊作深吸氣,聞是否具有蘑菇菌種特有的香味,原種和栽培種可取出小塊菌絲體觀察其顏色和均勻度,并用手指捏料塊檢查含水量是否符合標(biāo)準(zhǔn)。
2、顯微鏡檢查
在載玻片上滴一滴蒸餾水,然后挑取少許菌絲置水滴上,讓菌絲體充分展開,蓋好蓋玻片,再置顯微鏡下觀察。也可通過菌絲體染色后鏡檢觀察。蘑菇菌絲體應(yīng)粗壯,菌絲節(jié)較長,呈分枝狀,說明是正常菌種,如果菌絲節(jié)很短,分枝很濃密,菌絲較纖細(xì),生長緩慢,一般為不正常菌種。
3、菌絲生長速率測定
將所獲的菌種,轉(zhuǎn)接至PDA 培養(yǎng)皿中央, 待菌絲身皿邊輻射蔓管時, 用直徑0.5cm的打孔器,經(jīng)滅菌后打取邊緣菌絲,邊同培養(yǎng)基重新接入PDA 培養(yǎng)皿中央進(jìn)行培養(yǎng),每隔24小時,測定菌落直徑,直至菌落覆蓋全皿為止,從而耱出菌絲平均生長速度.
4、耐高溫測定
先將母種試管數(shù)支置于24℃下培養(yǎng),10天后取出部分試管置30℃下培養(yǎng),24小時后再放回24℃下培養(yǎng),經(jīng)過高溫的處理,如果菌絲仍然健壯,旺盛生長,則表明該菌種具有耐較高溫度的優(yōu)良特性,也可將母種試管移接至草基試管培養(yǎng)基中,置24℃下培養(yǎng)5天正常生長后,把試管置28℃下進(jìn)行培養(yǎng), 如果菌絲能較正常生長也表明該品種具有耐較高溫度的優(yōu)良特性。
5、 吃料能力鑒定 將試管母種接入新鮮配制的裝在試管中的糞草培養(yǎng)基中, 置24℃下進(jìn)行培養(yǎng),5天后觀察菌絲生長情況,如果菌種塊能很快萌發(fā),并迅速向培養(yǎng)料中生長伸展,則說明該品種的吃料能力強(qiáng);如果菌種萌發(fā)后生長緩慢, 遲遲不向四周和料層深處伸展,則表明該品種對培養(yǎng)料的適應(yīng)能力差,是劣質(zhì)菌種。
6、生理特征測定 蘑菇菌種的生理特征測定包括酶活力測定和遺傳分析兩方面。酶活力測定主要是進(jìn)行纖維素酶活力的測定,遺傳分析主要是進(jìn)行酯酶同工酶的檢測,以及RAPD檢測等,分析該品種的遺傳物質(zhì)是否保持原有品種的特征帶,如果遺傳分析發(fā)現(xiàn)主要標(biāo)記酶帶或擴(kuò)增帶發(fā)現(xiàn)變異說明該品種有可能出錯或已發(fā)生變異, 是劣質(zhì)菌種。
食用菌菌種的退化原因與復(fù)壯方法
1、菌種的退化
菌種在傳代過程中,因遺傳物質(zhì)發(fā)生變異而引起的使原有的優(yōu)良性狀漸漸消失或變壞,出現(xiàn)長勢差、出菇遲、產(chǎn)量不高、質(zhì)量不好、子實體叢生等現(xiàn)象。這些現(xiàn)象人們泛稱為“退化”。“退化”是一個群體概念,即栽培中子實體群體中有少數(shù)子實體與親本不同,不能算退化,只有相當(dāng)一部分乃至大部分個體的性狀都明顯變劣,群體生長性能顯著下降時,才能視為菌種退化。菌種退化往往是一個漸變的過程,菌種退化只有在發(fā)生有害變異的個體在群體中顯著增多以至占據(jù)優(yōu)勢時才會顯露出來。因此盡管個體的變異可能是一個瞬時的過程,但菌種呈現(xiàn)“退化”卻需要較長的時間。
2、菌種發(fā)生退化的原因
①、菌種混雜 在菌種繼代培養(yǎng)過程中,不同品種間交叉感染,導(dǎo)致不同品種的菌絲體混雜在一起,菌絲生長發(fā)生變異,導(dǎo)致原有品種生產(chǎn)性狀的改變,常常表現(xiàn)出產(chǎn)量下降、質(zhì)量變劣等。
②、有害突變的發(fā)生 一般來說,一個正常菌株經(jīng)過多代移植,不會導(dǎo)致遺傳性狀的改變。但是如果一個菌株的菌絲細(xì)胞中發(fā)生有害突變,而且突變體能適應(yīng)外界環(huán)境條件。那么,隨著移接次數(shù)的增加,有害突變體在菌絲細(xì)胞群中所占的比例會逐漸增大。這樣,該菌株的生產(chǎn)性能就會隨之惡化,退化現(xiàn)象就逐漸顯現(xiàn)出來。
③、雜交菌株的雙親核比例失調(diào) 雜交菌株的菌絲體在轉(zhuǎn)管過程中,受到外界環(huán)境、營養(yǎng)條件等改變的影響,其中一個親本的核發(fā)育正常逐漸占據(jù)優(yōu)勢而另一親本的核可能不適應(yīng)而逐漸減弱,這樣導(dǎo)致雙核比例的失調(diào),隨著擴(kuò)管代數(shù)的增加,核比例失調(diào)逐漸擴(kuò)大,最終導(dǎo)致在栽培中表現(xiàn)出退化現(xiàn)象。
?、?、病毒的感染 菌種感染病毒后,病毒不僅會隨著菌絲體的擴(kuò)大繁殖而增加,而且會通過帶毒孢子傳染下一代。當(dāng)菌種攜帶一定濃度的病毒粒子,在栽培中都會表現(xiàn)出明顯減產(chǎn),菇質(zhì)量下降等退化現(xiàn)象。
3、防止菌種退化的措施
?、佟⒁乐咕N的混雜,在菌種轉(zhuǎn)管,進(jìn)行出菇試驗等工作中,均應(yīng)加強(qiáng)品種隔離,減少品種間的混雜,以保證優(yōu)良品種的遺傳組成在較長時間內(nèi)能保持足夠的穩(wěn)定。
?、?、控制菌種傳代次數(shù) 菌種傳代次數(shù)越多,產(chǎn)生變異的機(jī)率就越高,因此菌種發(fā)生退化的概率就會越多,生產(chǎn)中應(yīng)嚴(yán)格控制菌種的移接代數(shù)。
?、?、采用有效的菌種保藏方法保存菌種 菌種保存應(yīng)是短期、中期和長期三者相結(jié)合,根據(jù)不同的要求從不同保藏方法中進(jìn)行擴(kuò)和移接,確保菌種能長期保持該品種的原有優(yōu)良性狀。
?、?、創(chuàng)造菌種生長良好營養(yǎng)條件和外界環(huán)境 菌種培養(yǎng)基的營養(yǎng)條件應(yīng)適宜,才能使菌種生長健壯,減少退化的發(fā)生。營養(yǎng)不足和過于豐富對菌種生長均不利。菌種的生長繁殖受到物理、化學(xué)、生物等外界條件的影響,如條件適宜,菌種生長正常,不易退化,不相適宜,則會引起菌種的退化。比如芳香族化合物,能誘發(fā)絨毛狀菌絲體成扇形菌落的形成,這種菌絲體在料床上易形成致密的白斑,導(dǎo)致產(chǎn)量下降。
?、?、對菌種可能遭受病毒的感染應(yīng)保持足夠的警惕。對有疑問的菌種要及時檢驗。確證已感染病毒,尤其是病毒粒子含量大,菌絲體及子實體性狀已受到嚴(yán)重影響的菌種,應(yīng)及時淘汰。
4、菌種的復(fù)壯
?、佟⒕z尖端分離進(jìn)行提純復(fù)壯,在顯微鏡下應(yīng)用顯微操作器把菌絲尖端切下轉(zhuǎn)移至新瓶的PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng),這樣可以保證該菌種的純度, 并且可以起到脫病毒的作用,使菌種保持原有品種的遺傳物質(zhì),恢復(fù)原來的生活力和優(yōu)良種性,達(dá)到復(fù)壯的目的。
?、?、適當(dāng)更換培養(yǎng)基,長期在同一培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)的菌種,生活力可能逐漸下降。將碳源、氮源、碳氮比、維生素、礦物質(zhì)營養(yǎng)作適當(dāng)調(diào)整,對因營養(yǎng)基質(zhì)不適而衰退的菌種,有一定的復(fù)壯作用。
③、菌種分離,要有計劃的把無性繁殖和有性繁殖的方法交替使用,反復(fù)進(jìn)行無性繁殖菌種會不斷衰退,而經(jīng)有性繁殖所產(chǎn)生的孢子,是食用菌生活史的起點,具有豐富的遺傳特性,因此必須定期進(jìn)行蘑菇菌株的單孢分離篩選,從中優(yōu)選出具有該品種原來優(yōu)良性狀的新菌株,逐漸替代舊菌株,這樣就可不斷地使該品種得到恢復(fù),長期使用。