1. 母種制備技術(shù) 從食用菌的孢子或子實體組織分離培養(yǎng)出來的第一次純菌絲體,稱為母種或者是一級菌種。由于第一次分離出的母種數(shù)量少,不能滿足生產(chǎn)的需要,進一步擴大培養(yǎng)后才能大 批量的生產(chǎn)。
(1)使用的材料和器皿
原料:馬鈴薯、葡萄糖或白糖、瓊脂。
器皿:臺秤、燒杯、量簡、小鍋、漏斗、試管。
材料:牛角匙、小刀、繩、棉花、紗布、紙。
(2)配制方法和步驟
馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂、培養(yǎng)基的配方: 將馬鈴薯洗凈,去皮,如有芽眼去掉,稱取200克。切成花生豆大小的塊,量取1000毫 升水,倒入小鍋中,把切好的馬鈴薯塊一并倒入。開鍋后記時,維持20-3 0分鐘,加熱完 后用三層紗布過濾,去渣,得到馬鈴薯汁,如果馬鈴薯汁不足 1000毫升,補水1000毫升, 而后再倒入鋁鍋中,加人稱量好的瓊脂20克,加熱溶化,然后加葡萄糖25克溶解,即得到 培養(yǎng)基。培養(yǎng)基做好后即可分裝試管,用棉塞塞入試管的深度1寸左右 為宜。把培養(yǎng)基倒人漏斗內(nèi)分裝試管,每支裝量1寸左右,分裝完畢后每5-6支一組,用雙層報紙捆成捆,將捆成捆的培養(yǎng)基放進滅菌鍋內(nèi)滅菌,然后在試管上蓋上報紙,將滅菌鍋冷凝管插入內(nèi)筒小孔內(nèi),將螺母對稱扣緊,加熱滅菌30分鐘,最后晾斜面,凝固后備用。
接種和培養(yǎng): 接種室和接種箱在使用前進行清潔消毒,一般用紫外線燈照射半小時,或用甲醛加5克高錳酸鉀密閉熏蒸4個小時。接種前,接種人員要用酒精擦拭雙手,試管及一切接種設備,進行表面消毒,試管上貼上標簽,注明菌種名稱,接種日期和接種人姓名。
接種時,選擇菌絲健壯,生長旺盛,無老化,沒有感染雜菌的母種試管,在消過毒的無菌室或接種箱內(nèi),按無菌操作要求進行操作,接種鏟用酒精消毒,再在酒精燈火焰上灼燒滅菌,將接種鏟放在接種試管內(nèi)冷卻,迅速轉(zhuǎn)移到母管內(nèi),將菌絲及培養(yǎng)基挑起綠豆大小一塊快速移入另一支斜面培養(yǎng)基中央定植。迅速將接種鏟拿出,在酒精燈火焰旁塞緊棉塞兒,然后將試管捆成捆,放入恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)。在25℃條件下培養(yǎng)7天,菌絲就可以長滿試管。制作原料要避光,防潮、防雜菌感染。每支母管可擴大20-80支新管。