任何一個香菇品種,經(jīng)過組培或孢子培養(yǎng)制成原始母種(保藏種)由原始母種轉擴,即為生產(chǎn)母種。
生產(chǎn)母種通常用PDA培養(yǎng)基,選用180×18毫米試管,制成斜面試管接種而成。PDA培養(yǎng)基配方:
土豆(去皮、去芽) 200克(也可用淀粉,用量為6克/1000毫升)
葡萄糖 20克
瓊脂 20克
磷酸二莖鉀 2克
復合維生素B 2克
旦白棟 5克
硫酸鎂 0.3克
加水 1300毫升
上述配方可配制1000毫升溶液培養(yǎng)基。配制方法:土豆去皮、去芽,稱重,切成0.5厘米厚片,放入24公分鋁鍋中,加入1300毫升水,煮沸5~8分鐘,用雙層紗布過濾,取其濾液重新倒入鍋中加入瓊脂,煮沸后轉小火,使瓊脂溶化,將維生素B在研體內(nèi)加入少量水研磨成稀漿,再倒入鍋中,同時,加入葡萄糖、磷酸二莖鉀、旦白棟和硫酸鎂,攪勻后趁熱分裝試管,裝入試管內(nèi)的溶液高度以試管的1/4為宜,塞上棉塞,置于高壓滅菌鍋中1.5個大氣壓,滅菌30分鐘,或用蒸鍋蒸75分鐘,滅菌后趁熱擺斜面,培養(yǎng)基斜面長度以占試管的3/4弱為宜。如棉塞潮濕,要進行烘烤3~5小時,否則,潮濕棉塞易染雜菌。斜面培養(yǎng)基試管置干燥處3天后,若斜面無雜菌形成,表明滅菌徹底,即可用于接種。
接種:通常在接種箱內(nèi)進行。先將斜面試管放入接種箱內(nèi),再用75%酒精擦接種及待接菌種試管,放入接種箱,同時放入酒精燈、接種針,用2~5克煙霧劑點燃煙熏30分鐘后,即可接種。接種前,先點燃酒精燈,用75%酒精擦手,用酒精燈火燒接種針,冷卻后,放入待接菌種試管內(nèi),左手拖握菌種試管和斜面試管、右手用姆指、食指和中指象拿筆一樣握接種針,在菌種試管內(nèi)挑取米粒大小菌塊放入斜面試管中,塞上棉塞即可,一支菌種試管可接50~60以斜面試管。接完種后,每5支斜面試管捆包在一起,放入培養(yǎng)室內(nèi),在23~25℃條件下,12~15天長滿試管斜面,該即為生產(chǎn)母種。