【書摘】
4．菌種制備
(1)接種場所的消毒
    菌種制備的過程需要在預(yù)先消毒過的接種箱或接種室內(nèi)進(jìn)行。消毒就是采用物理或化學(xué)的方法將有害微生物殺死，一般采用的方法有藥物熏蒸、藥液噴霧或紫外線照射，若三者并用，效果更佳。
    接種箱的消毒 接種箱多用于分離菌種和小規(guī)模的接種。
    使用前先用0．25%新潔爾滅溶液將箱內(nèi)揩擦干凈，然后用甲醛熏蒸消毒。一般每立方米空間需用40%甲醛溶液8毫升和高錳酸鉀5克氣化熏蒸。熏蒸時(shí)將接種工具、器皿放人箱內(nèi)，把稱好的高錳酸鉀放人罐頭瓶內(nèi)，再將甲醛倒人，迅速關(guān)好接種箱，二者反應(yīng)產(chǎn)生的熱量將甲醛變?yōu)檎魵舛涑庹麄€(gè)箱體，就這樣密閉8~12小時(shí)。工作前再用紫外線燈照射20～30分鐘，以達(dá)到空間殺菌的目的。照射結(jié)束后，隔30分鐘就可以開始工作。
如果接種箱只用于少量的接種工作，則在使用前30分鐘。噴一次5%石炭酸液，并同時(shí)用紫外線照射20—30分鐘就可以了。因?yàn)榻臃N時(shí)試管口還有酒精燈火焰封口這一關(guān)，一般被污染雜菌的可能性不大。
    接種室的消毒 接種室空間較大，使用前一天必需進(jìn)行熏蒸消毒殺菌，方法同接種箱的消毒。由于甲醛對人的眼、鼻有強(qiáng)烈的刺激作用，可在熏蒸后12小時(shí)，量取與甲醛液等量的氨水，倒人容器迅速放人室內(nèi)與甲醛中和，可以減少甲醛的刺激作用，該工作至少在接種前2小時(shí)進(jìn)行。每次接種前，常用5%石炭酸溶液噴霧，用以殺菌和沉降空氣中的微粒及雜菌孢子，使室內(nèi)空氣凈化。之后，打開紫外燈照射l小時(shí)。照射結(jié)束后，隔30分鐘再人室作業(yè)。若連續(xù)使用
    接種室，必須重新進(jìn)行全面消毒。
(2)接種方法
    原種的接種 接種箱消毒之后，就可以開始接種。操作之前要將手洗干凈，再用75%酒精棉球擦手。操作時(shí)，左手拿起試管，右手拿接種針，將接種針放在酒精燈火焰上灼燒。冷卻后，在酒精燈火焰附近拔開試管棉塞，試管口向下傾斜，用酒精燈火焰封口。接著把接種針伸人斜面菌種的試管內(nèi)，鉤取一小塊帶培養(yǎng)基的菌種塊，在菌種塊出入試管口時(shí)不要接觸管壁或管口，也不要過火焰，以防燙死或燒傷菌種。迅速把菌種塊移人試管培養(yǎng)基的中部，把棉塞頭的四周在火焰上燒一下，然后立即將棉塞塞人試管口。塞人后將棉塞旋轉(zhuǎn)一兩下，使之與管壁緊貼(圖3．17)。根據(jù)斜面的大小，每支斜面菌種可擴(kuò)大移植20～50支。轉(zhuǎn)管繁殖的次數(shù)不宜過多，否則菌絲老化，菌種質(zhì)量下降，給生產(chǎn)帶來不利。接好試管放人恒溫箱避光培養(yǎng)。
    對于分離得到的原種。必須進(jìn)行純化。純化方法是在菌落的邊緣挑取先端菌絲體，移植到試管斜面培養(yǎng)基上在適溫下培養(yǎng)。如此移植2～3次就達(dá)到了純化的目的。
    母種的接種 制作母種的目的，就是將優(yōu)質(zhì)的原種進(jìn)一步擴(kuò)大繁殖，增加菌種的數(shù)量以滿足制栽培種的需要。接種的要求和基本操作與原種接種相同。母種的培養(yǎng)基多用鋸木屑、棉籽殼、農(nóng)作物秸稈、谷粒等物質(zhì)，盛裝容器多用菌種瓶、罐頭瓶或塑料袋，經(jīng)高壓滅菌后，必須先冷卻再接種，一般一支原種可接4～6瓶母種(圖3—18)。接好的母種貼上標(biāo)簽放人培養(yǎng)室避光培養(yǎng)，一般經(jīng)30～45天，菌絲即可長滿瓶。銀耳母種的菌齡應(yīng)控制在15天左右。